微生物检验技术介绍

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1、微生物检验技术XLD琼脂（XyloseLysineDesoxycholateAgar）Contents1一、培养基的制备技术2二、无菌技术3三、纯培养技术四、显微技术45五、生化鉴定一、培养基的制备技术培养基人工配制的，适合微生物生长、繁殖或产生代谢产物的营养基质（一）培养基的类型1.按物理状态来分液体培养基：不含凝固剂，利于菌体的快速繁殖、代谢和积累产物流体培养基：含0.05～0.07%琼脂粉，有利于一般厌氧菌的生长繁殖半固体培养基：含0.2～0.8%琼脂粉，多用于细菌的运动能力观察、菌种传代保存及贮运细菌标本

2、材料等固体培养基：含1.5～2.0%琼脂，多用于细菌的分离、鉴定、菌种保存及细菌疫苗制备等方面2.按成分来分１）天然培养基：指利用各种动、植物或微生物的原料，其成分难以确切知道。例如：牛肉膏、麦芽汁、蛋白胨、酵母膏、玉米粉、麸皮、各种饼粉、马铃薯、牛奶、血清等２）合成培养基是一类化学成分和数量完全知道的培养基，是用已知化学成分的化学药品配制而成３）半合成培养基(综合培养基）：在合成培养基中，加入某种或几种天然成分；或者在天然培养基中，加入一种或几种已知成分的化学药品即成半合成培养基。例如马铃薯蔗糖培养基等3.按功能来分

3、选择性培养基——含有目标菌生长需要的特殊营养物质,抑制非目标菌生长的抑制剂选择性增菌培养基——液体选择性分离培养基——固体鉴别培养基——通过指示剂或指示剂和抑菌剂的共同作用来鉴别不同类型的微生物4.按制备方法分类自行配制——成本相对较低，但繁琐，质量不稳定。即用型培养基——使用方便，但保质期短。干粉培养基——使用方便，质量稳定，易保存，推广空间广阔。（二）培养基中的成分1.水：自来水、蒸馏水2.琼脂：透明、无味，化学结构稳定，不易被微生物分解利用，在培养基中仅起凝固剂的作用3.氮源（1）有机氮源（2）无机氮源硫

4、酸铵尿素碳酸氢铵硝酸铵氮气等4.碳源类5.稀释溶液磷酸盐缓冲液、生理盐水、缓冲蛋白胨等6.无机盐锌、钴、锰、铁、钙、铜、镁、硫、磷、钾、钠7.生长素氨基酸、嘌呤、嘧啶、维生素等8有鉴别指示作用的成分pH指示剂观察各种细菌对糖、醇和苷类等碳水化合物的发酵反应糖、醇、苷类用以鉴别细菌的发酵。有机酸盐类pH值下降，使指示剂的颜色改变；铅盐沉淀氨基酸和蛋白质靛基质、霍乱红和硫化氢反应；蛋白胨、氨基酸、尿素以及明胶等酶解试验其他鉴别成分卵磷脂（或卵黄）、磷酸酯、甘油三丁酯、吐温等酶类水解试验。（三）培养基的制备和使用1.

5、称量和复水2.溶解3.pH值调节4.分装5灭菌和贮藏煮沸湿热灭菌或过滤除菌添加成分4℃冰箱内备用6.使用琼脂培养基的融化添加成分的加入培养弃置二、无菌技术几个常见的概念：灭菌、消毒、防腐无菌技术二.无菌技术1.常用器具的灭菌常用器具：试管、烧瓶、培养皿、涂棒、移液管、接种环等方法：这些器具在灭菌前须先进行包扎或装入特定容器中。（1）高压蒸汽灭菌0.1MPa121.3℃15~30min（2）高温干热灭菌160~170℃2h（3）烧灼灭菌2.培养基的灭菌高压蒸汽灭菌过滤灭菌：适于不耐温的材料3.操作台、无菌

6、室（无菌箱）紫外杀菌、臭氧消毒、消毒剂等无菌技术的用具和设备接种环和接种针酒精灯超净台/生物安全柜无菌室无菌操作在火焰旁或无菌箱、超净工作台上操作。无菌操作倒平板三、纯培养技术纯培养技术：把特定微生物从自然界混杂存在的状态中分离、纯化出来的技术纯培养（pureculture）：微生物学中将在实验室条件下，从一个细胞或一种细胞群繁殖得到的后代，称为纯培养混合培养物：含有两种以上微生物的培养物二元培养物：只含有二种微生物，并保持二者之间特定关系的培养物无菌操作（一）稀释法1.稀释平板法2.液体稀释法：适于细胞较

7、大的微生物待分离材料→接种于培养液中→培养→测定或估计单位容积中的含菌数目→稀至两、三滴液体中只含有一个微生物个体→每次取一滴至另一盛有新鲜培养基的试管中→摇匀，培养→观察→大多数试管无微生物生长，少数管底有一菌落，可能由一个细胞繁殖而来。3.稀释摇管法：适于分离严格厌养菌。一系列盛由固体培养基的试管→加热熔化→冷却至50℃左右加入待分离材料进行梯度稀释→迅速摇匀→冷凝→倾注一层灭菌过的石蜡→培养→挑取单个菌落.（二）平板划线分离法（三）单细胞（单孢子）挑取法适用于分离混杂微生物中弱势群体方法：（1）用显微操作仪

8、在显微镜下用毛细吸管或显微针、钩、环等挑取→获得纯培养（2）用一般显微镜，将一滴经适当稀释后的菌液置于载玻片上，选取只含有一个细胞的液滴进行纯培养的分离此法多限于高度专业化的科学研究中采用（四）利用选择培养基分离法1.抑制其它微生物的生长控制pH、温度，加抗生素等2.富集培养光照、温度、高压、紫外线、氧气、