《链球菌肠球菌》ppt课件

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1、实验五链球菌及肠球菌的鉴定目的要求：1.掌握链球菌属及肠球菌属的分离培养与鉴定方法。2.掌握链球菌及链球菌的菌落特点、菌体形态及染色性。步骤与方法1、观察菌落将菌株接种于血琼脂平板上，35℃孵育18-24h后观察菌落，记录菌落大小、形态、表面、边缘、透明及颜色、有无溶血及特点。将肺炎链球菌继续孵育2-3天看菌落中心有无凹陷呈“脐状”。链球菌的溶血性β溶血性链球菌2、形态观察涂片、革兰氏染色镜检，记录镜下细菌染色性、大小、形态、排列及荚膜。肺炎链球菌S.pneumoniae形态与染色：G+球菌,矛头状,成双排列，宽端相对，尖端向外,有荚膜肺炎链

2、球菌革兰染色有荚膜肺炎链球菌荚膜染色特点肺炎链球菌S.pneumoniae培养特性：营养要求高，兼性厌氧。初次分离需提供5%-10%的CO2。18-24h后血平板上形成灰白色、圆形、针尖样的菌落。菌落周围有草绿色溶血环。肺炎链球菌S.pneumoniae培养特性：培养48h后，菌落有自溶现象，菌落的中心会出现凹陷，像“肚脐”称脐状凹陷。肺炎链球菌S.pneumoniae主要生化反应optochin试验:含5μgoptochin纸片贴于涂布有待测菌的平板上35℃孵育过夜，抑菌圈大于14mm即为敏感。甲型溶血链球菌(R)肺炎链球菌(S)胆汁溶菌试

3、验原理：胆汁或胆盐能活化肺炎链球菌的自溶酶，促进细菌细胞膜破损或菌体裂解而自溶。方法：A、平板法：在血琼脂平板上选择出待检的草绿色溶血的菌落，观察记录菌落特点，然后于菌落上加一滴去氧胆酸钠溶液，35℃孵育15-30min观察结果。B、试管法：将甲型链球菌和肺炎链球菌血清肉汤培养液1ml分别加入2支试管，再于各管中加入去氧胆酸钠溶液0.1ml，摇匀后置于37℃水浴30min后观察结果。结果判断：平板法若菌落消失为阳性，不消失为阴性，试管法若液体由浑浊变透明为阳性，不透明为阴性，此试验是鉴别甲型溶血性链球菌和肺炎链球菌的重要试验，后者阳性。痰标本

4、肺炎链球菌革兰染色A群(化脓性)链球菌生物学性状球形或椭圆形，链状排列，革兰染色阳性(G＋)，无芽胞，无鞭毛，透明质酸的荚膜。1.形态与染色化脓性链球菌A群(化脓性)链球菌生物学性状营养要求高：血平板或含血清培养基；液体培养为沉淀生长；血平板呈灰白色表面光滑小菌落，不同菌株溶血不一，多数有透明溶血环(b溶血现象)。2.培养特性杆菌肽敏感试验原理：A群化脓性链球菌对杆菌肽几乎100%敏感，而其他链球菌对杆菌肽通常耐药。方法：挑取被检菌落，密涂于血琼脂平板上，将杆菌肽纸片（0.04U/片）贴于平板上，35℃孵育18-24h观察。结果判断：出现抑菌

5、环为敏感，推断为A群化脓性链球菌。B化脓性链球菌杆菌肽阳性B群无乳链球菌CAMP试验原理：B群溶血性链球菌能产生CAMP因子，该物质可促进金黄色葡萄球菌β溶血素的活性，故在血琼脂平板上两菌交界处溶血能力增强，形成箭头状透明溶血区。方法：在羊血琼脂平板上，用金黄色葡萄球菌划种一条横线，在将被检菌距金葡菌接种线3mm处直角接种一短线，35℃培养18-24h观察结果。同时设阳性对照和阴性对照。结果报告：在两种细菌划线的交接处出现箭头型透明溶血区为阳性，否则为阴性，此试验为B群链球菌与其他链球菌鉴别的重要试验，无乳链球菌为阳性，其他为阴性。无乳链球菌

6、CAMP试验阳性CAMP阳性马尿酸水解试验原理：B群链球菌有马尿酸水解酶，可水解马尿酸为苯甲酸和甘氨酸，苯甲酸可与FeCl3，结合形成苯甲酸铁沉淀。方法：取待检菌纯培养物接种于马尿酸钠培养基，35℃培养48h，3000r/min离心30min,吸取上清液0.8ml于另一试管，加入FeCl30.2ml，立即混匀，10-15min观察结果。结果：出现恒定沉淀物为阳性。3、生化反应1）触酶试验：链球菌属为阴性。（6）血清学试验（链球菌快速分群乳胶凝集试验）原理：Lancefield根据链球菌细胞壁中多糖抗原的不同，将链球菌分为20多个群，对人类治病

7、的多数为A群，偶见B、C、D、F、G群。用这6群抗原的兔免疫血清分别致敏的乳胶颗粒，与具有相应群特异性抗原的链球菌发生间接乳胶凝集反应，可在10min内对链球菌作出主要的分群鉴定。方法：挑取菌落2-3个转种于含有提取酶的试管中，使其成为乳化均匀的菌悬液，置37℃水浴15min。在卡片的相应区域滴加一滴A、B、C、D、F、G致敏胶乳，再加入处理后的菌悬液一滴分别与胶乳混匀，同时在卡片相应区域加一滴控制液与任意一滴致敏乳胶混匀，作为阳性对照，轻摇卡片，观察结果。结果判断：在2-10min内发生胶乳凝集，为阳性。待检菌与哪群致敏胶乳凝集就表明该菌为

8、相应血清群的链球菌。Lancefield血清凝集分型（7）胶乳凝集试验：原理：抗链球菌溶血素“O”（ASO）高滴度的病人血清被适量的溶血素“O”中和后，失去了正常水