链球菌、肠球菌课件

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1、实验十球菌、肠道菌目的要求：1.掌握链球菌属及肠球菌属的分离培养与鉴定方法。2.掌握链球菌及链球菌的菌落特点、菌体形态及染色性。3.掌握抗“o”试验的操作及临床意义链球菌的溶血性β溶血性链球菌肺炎链球菌S.pneumoniae形态与染色：G+球菌,矛头状,成双排列，宽端相对，尖端向外,有荚膜肺炎链球菌革兰染色有荚膜肺炎链球菌S.pneumoniae培养特性：营养要求高，兼性厌氧。初次分离需提供5%-10%的CO2。18-24h后血平板上形成灰白色、圆形、针尖样的菌落。菌落周围有草绿色溶血环。肺炎链球菌S.pneumoniae培养特性：培养48h后，菌落

2、有自溶现象，菌落的中心会出现凹陷，像“肚脐”称脐状凹陷。肺炎链球菌S.pneumoniae主要生化反应optochin试验:含5μgoptochin纸片贴于涂布有待测菌的平板上35℃孵育过夜，抑菌圈大于14mm即为敏感。甲型溶血链球菌(R)肺炎链球菌(S)痰标本肺炎链球菌革兰染色A群(化脓性)链球菌生物学性状球形或椭圆形，链状排列，革兰染色阳性(G＋)，无芽胞，无鞭毛，透明质酸的荚膜。1.形态与染色化脓性链球菌A群(化脓性)链球菌生物学性状营养要求高：血平板或含血清培养基；液体培养为沉淀生长；血平板呈灰白色表面光滑小菌落，不同菌株溶血不一，多数有透明溶

3、血环(b溶血现象)。2.培养特性杆菌肽敏感试验原理：A群化脓性链球菌对杆菌肽几乎100%敏感，而其他链球菌对杆菌肽通常耐药。方法：挑取被检菌落，密涂于血琼脂平板上，将杆菌肽纸片（0.04U/片）贴于平板上，35℃孵育18-24h观察。结果判断：出现抑菌环为敏感，推断为A群化脓性链球菌。B化脓性链球菌杆菌肽阳性无乳链球菌CAMP试验阳性CAMP阳性Lancefield血清凝集分型肠球菌属步骤和方法1、菌落观察:将菌株接种于血琼脂平板上，35℃孵育18-24h后观察菌落，肠球菌在血琼脂平板上呈灰白色、不透明、表面光滑的小菌落，菌落周围可出现α溶血环，也可无

4、溶血环。2、形态观察涂片、革兰氏染色镜检，记录镜下细菌染色性、大小、形态及排列。肠球菌形态类似链球菌，为单个、成双或短链状排列的卵圆形革兰氏阳性球菌。3、生化反应：（1）触酶试验：肠球菌属为阴性反应。（2）胆汁-七叶苷试验：原理：培养基的胆汁对某些细菌有抑制作用，只有既能在胆汁中生长，又能水解七叶苷的细菌才能表现出对七叶苷的水解活性。肠球菌能在胆汁中生长，并水解七叶苷，使培养基变黑。方法：将被检菌1~3个菌落接种于胆汁-七叶苷琼脂培养基，35℃孵育18~24h。结果：细菌生长，且培养基变黑色或棕褐色为阳性，不变色为阴性。肠球菌为阳性。（3）65g/LN

5、aCl生长试验：原理：肠球菌有很强的耐盐能力，能在65g/LNaCl血清肉汤培养基中生长，而链球菌的耐盐能力较弱，在此培养基中不能生长。方法：将待检菌接种65g/LNaCl血清肉汤中，35℃孵育18-24h。结果：细菌生长且使得培养基变黄为阳性，不生长为阴性，肠球菌为阳性。（3）PYR试验：原理：多数肠球菌含有吡咯烷酮芳基酰胺酶，能水解吡咯烷酮-β-萘基酰胺（PYR），释放出β-萘基酰胺，与PYR试剂作用形成红色复合物。方法：挑取被检菌落在含有PYR的纸片上涂擦，35℃孵育5min，再于纸片上滴加PYR试剂，观察纸片颜色。结果：约1min后纸片呈红色为

6、阳性，不变色为阴性。肠球菌、A群链球菌和某些凝固酶阴性的葡萄球菌为阳性。脑膜炎奈瑟菌痢疾志贺菌伤寒沙门菌霍乱弧菌结核分枝杆菌白喉杆菌破伤风杆菌产气荚膜杆菌白色念珠菌肉毒杆菌淋球菌炭疽杆菌二、抗“o”实验1.实验原理：溶血性链球菌能产生溶血素“o”，链球菌感染患者，血清中可出现针对溶血素“o”的抗体。2.操作：（1）加待测血清，阴性、阳性对照血清各1滴（2）将胶乳液轻轻摇匀后，每孔各加1滴胶乳试剂（3）轻轻摇动玻片，使胶乳液与血清混合均匀（4）每孔各用一个搅拌棒进行搅拌，使胶乳液与血清充分混合均匀。三、操作过程五、注意事项1.不能使用过期产品2.搅拌棒的

7、使用为每孔一个，不能混合使用。六、临床意义本实验常用于风湿性疾病、风湿热及其活动期的辅助检查。教师示范，分组练习七、作业1.绘出常见病原性球菌形态图2.记录抗“O”实验结果并分析Thanks!