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时间:2019-07-23
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1、蛋白质工程的崛起一、蛋白质工程崛起的缘由满足人类生产和生活的需要例1:改造干扰素(半胱氨酸)体外很难保存干扰素(丝氨酸)体外可以保存半年玉米中赖氨酸含量比较低天冬氨酸激酶(352位的苏氨酸)二氢吡啶二羧酸合成酶(104位的天冬酰胺)天冬氨酸激酶(异亮氨酸)二氢吡啶二羧酸合成酶(异亮氨酸)玉米中赖氨酸含量可提高数倍改造改造例2:二、蛋白质工程的基本原理天然蛋白质合成的过程——遵循中心法则逆转录转录DNARNA翻译蛋白质复制复制肽链盘曲折叠具有空间结构的蛋白质表达生物特有的功能或性状蛋白质工程基本途径:预期的蛋白质功能设计预期的蛋白质结构推测应有的氨基酸序列找到相对应的脱
2、氧核苷酸序列(基因)蛋白质三维结构氨基酸序列多肽链基因DNA预期功能DNA合成分子设计mRNA生物功能转录翻译折叠图1-29蛋白质工程流程图1.怎样得出决定这一段肽链的脱氧核苷酸序列?请把相应的碱基序列写出来。讨论:某多肽链的一段氨基酸序列是:……-丙氨酸-色氨酸-赖氨酸-甲硫氨酸-苯丙氨酸-……丙氨酸:GCU、GCC、GCA、GCG色氨酸:UGG赖氨酸:AAA、AAG甲硫氨酸:AUG苯丙氨酸:UUU、UUCGCU(或C或A或G)UGGAAA(或G)AUGUUU(或C)mRNA序列脱氧核苷酸 序列GCT(或C或A或G)TGGAAA(或G)ATGTTT(或C)CGA(或
3、G或T或C)ACCTTT(或C)TACAAA(或G)2.确定目的基因的碱基序列后,怎样才能合成或改造目的基因(DNA)?确定目的基因的碱基序列后,就可以根据人类的需要改造它,通过人工合成的方法或可以通过基因的定点诱变技术来改变后从基因文库中获取。比较基因工程和蛋白质工程基因工程蛋白质工程相同点都要改造基因,都属于分子水平产生新的基因型,无新基因基因(型)产生的蛋白质原有的新的联系蛋白质工程以基因工程为基础,是基因工程的应用和延伸成功实例一:胰岛素改造天然胰岛素制剂在储存中易形成二聚体和六聚体,延缓胰岛素从注射部位进入血液,从而延缓了其降血糖作用,也增加了抗原性,这是胰
4、岛素B23-B28氨基酸残基结构所致。利用蛋白质工程技术改变这些残基,则可降低其聚合作用,使胰岛素快速起作用。该速效胰岛素已通过临床实验。三、蛋白质工程的进展和前景成功实例二:水蛭素改造水蛭素是水蛭唾液腺分泌的凝血酶特异抑制剂,它有多种变异体,由65或66个氨基酸残基组成。水蛭素在临床上可作为抗栓药物用于治疗血栓疾病。为提高水蛭素活性,在综合各变异体结构特点的基础上提出改造水蛭素主要变异体HV2的设计方案,将47位的Asn(天冬酰胺)变成Lys(赖氨酸),使其与分子内第4或第5位Thr(苏氨酸)间形成氢键来帮助水蛭素N端肽段的正确取向,从而提高凝血效率,试管试验活性提
5、高4倍,在动物模型上检验抗血栓形成的效果,提高20倍。三、蛋白质工程的进展和前景三、蛋白质工程的进展和前景前景诱人难度很大
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