数字PCR技术进展_林彩琴

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1、第24卷第12期化学进展Vol．24No．122012年12月PROGRESSINCHEMISTRYDec．，2012*数字PCR技术进展＊＊林彩琴姚波(浙江大学化学系杭州310058)摘要数字PCR是近年来迅速发展起来的一种定量分析技术。与传统定量PCR技术不同的是数字PCR不依赖于扩增曲线的循环阈值(C)进行定量，不受扩增效率的影响，也不必采用看家基因和标准曲线，T具有很好的准确度和重现性，可以实现绝对定量分析。迄今为止，已有Fluidigm、Bio-Rad等几家公司相继推出了数字PCR产品，这些产品已经在单细胞分

2、析、癌症早期诊断和产前诊断等研究领域显示出巨大的技术优势和应用前景。本文在现有文献基础上，对数字PCR技术的基本原理和定量方法进行介绍，并对该技术的分类及其特点以及目前的主要应用领域进行评述。关键词数字PCR微流控芯片基因分析中图分类号:Q503;TP212.3文献标识码:A文章编号:1005-281X(2012)12-2415-09RecentAdvanceinDigitalPCR＊＊LinCaiqinYaoBo(DepartmentofChemistry，ZhejiangUniversity，Hangzhou310

3、058，China)AbstractDigitalPCR，anewtechniquederivedfromtraditionalPCRandquantitativePCR，hasrevealedgreatpotentialingeneticprofiling，prenataldiagnosis，cancerrelatedallelandmutationdetection．DigitalPCRusuallyinvolvestwosteps:partitioningoflimitingdilutionsampleintot

4、enstothousandsofindividualreactionsfollowedbyPCRamplificationandendpointdetectiontoidentifythepresenceorabsenceoftemplatemoleculesineachreaction．DifferentwithrealtimeqPCRwhichgreatlydependsoncyclethreshold(C)andrequireshouse-Tkeepinggeneandstandardcurveforrelati

5、veandabsolutequantification，digitalPCRperformsquantificationthroughdirectcountingofthewellswithpositiveamplificationorcalculatingtheconcentrationbasedonPoissonalgorithm．Itminimizesthemeasurementuncertaintycausedbyvariationofamplificationefficiencyandhashigheracc

6、uracyandreproducibility．Inrecentyears，greateffortshavebeenmadetodevelopnewmethodsfordigitalPCRtoimproveitssensitivityandreduceitscost．MoreandmoretechniqueswerecommercializedsoonafteritwasfreshlypublishedbylargecompaniesincludingBio-Rad，Lifetechnologyandsoon．Inth

7、isarticle，theprincipleofdigitalPCRanditsquantificationmethod，differenttypesofthistechniqueanditspracticalapplicationsarereviewedanddiscussed．KeywordsdigitalPCR;microfluidicchip;geneanalysis3QuantificationmethodContents4ClassificationofdigitalPCR1Introduction4.1M

8、icrochamber/plate2PrincipleofdigitalPCR4.2Integratedfluidiccircuit(IFC)收稿:2012年5月，收修改稿:2012年7月*国家自然科学基金项目(No．20905064，20890020)和高等学校博士点基金项目(No．20090101120007)资助＊＊Corr