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时间:2019-07-23
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1、致泻性大肠杆菌检验技术河北省疾病预防控制中心细菌寄生虫病防治与消毒所甄素娟概念大肠杆菌的部分血清型可引起肠道感染,称为致泻性大肠杆菌致泻性大肠杆菌按照毒力因子、致病机理和流行病学特征分为5类肠致病性大肠杆菌(EPEC)肠侵袭性大肠杆菌(EIEC)肠产毒性大肠杆菌(ETEC)肠出血性大肠杆菌(EHEC)肠聚集性粘附大肠杆菌(EAggEC)生物学性状形态大肠杆菌是革兰氏阴性短杆菌,大小为1.0~1.5µm×2.0~6.0µm多有鞭毛,约为4~6根,为周毛菌。没鞭毛的细菌也可使人或动物致病大肠杆菌具有菌毛,分为性菌毛、普通菌毛和与致病性有关的
2、菌毛。与细菌致病性有关的菌毛有:K88、K99、987P、CFAⅠ、F41CFAⅡ等培养特性大肠杆菌在普通营养琼脂上生长良好,最适生长温度为37℃,42~44℃仍能生长。兼性厌氧菌,氧气充足生长较好。最适生长pH为6.8~8.0,低于6.0或高于8.0生长缓慢。在普通培养基上的菌落形态光滑型:菌落边缘整齐,表面有光泽、湿润、光滑,呈灰色,在生理盐水中容易分散。粗造型:菌落扁平,边缘不整齐,易在生理盐水中自凝。粘液型:常为含有荚膜的菌株。生化特征-1分解乳糖、葡萄糖、麦芽糖、甘露醇、木糖、阿拉伯糖等多种糖类,产酸产气。在肠道鉴别培养基上形
3、成有色菌落。吲哚试验、甲基红试验阳性;V-P试验阴性;不能利用柠檬酸盐作为碳源;分解葡萄糖铵盐;不分解尿素;明胶液化阴性;不分解侧金盏花醇;在氯化钾培养基上不生长。生化特征-2EIEC:不发酵或迟缓发酵乳糖,不产气,除O124外无动力;乳糖、蔗糖不产酸或产酸,葡萄糖产酸产气或不产气,H2S阴性,靛基质阳性,酒石酸盐阴性,赖氨酸脱羧酶阴性。O157:H7大肠杆菌不发酵山梨醇或迟缓发酵,在CT-SMAC平板上菌落为白色;绝大多数不具有葡萄糖醛酸酶,不能水解4-甲基伞形花内酯-β-D葡萄糖酸苷,不能产生荧光;绝大多数EHEC发酵棉子糖、卫矛醇
4、,能够利用鸟氨酸赖氨酸,其他大肠杆菌中20%左右发酵棉子糖,50%左右发酵卫矛醇,有部分大肠杆菌不能利用鸟氨酸赖氨酸。抗原结构大肠杆菌的表面抗原包括菌体抗原(O抗原)、鞭毛抗原(H抗原)、荚膜抗原(K抗原)O抗原即细胞壁外膜上的脂多糖(LPS),目前已发现O抗原有170多个血清型,H抗原有55种左右。最初分离的菌株动力往往较差,与H抗血清的反映凝集差,需在半固体培养基上传代以利于鞭毛的生长。致病物质与所致疾病在肠道内一般不致病,但如果移位侵入肠道外的组织或器官可引起肠外感染,以化脓性炎症最为多见。引起泌尿系统感染的大肠杆菌称为泌尿道致病
5、性大肠杆菌(UPEC),引起尿道炎、膀胱炎、肾盂肾炎。一些大肠杆菌还引起腹膜炎、胆囊炎、阑尾炎、手术创口感染等。在婴幼儿、老年人或免疫力极低的病人中可引起败血症。肠产毒性大肠杆菌ETEC是第三世界国家细菌性腹泻和旅游者腹泻的主要病原之一ETEC分泌耐热肠毒素(ST)、不耐热肠毒素(LT),具有与致病性相关的菌毛等。ETEC通过菌毛粘附在小肠上皮细胞,释放毒素ST和LT,刺激腺苷环化酶或鸟苷环化酶的生产,引起肠液分泌和聚积,产生水样腹泻。肠侵袭性大肠杆菌EIEC的毒力因子和致病机制志贺氏菌基本一致,临床症状与细菌性痢疾不易区分,主要是发烧
6、、腹部剧烈疼痛与不适、毒血症、水样腹泻,粪便中有少量粘液和血。EIEC通常侵犯大肠,使大肠上皮细胞刷状缘发生局部破坏,细菌被摄入细胞内,侵犯并破坏细胞基底膜,在细胞内扩散、繁殖,并在细胞间扩散,引起细胞的死亡,造成炎症和溃疡。EIEC的侵袭力由120~140MD的大质粒编码,与编码志贺氏菌侵袭力的大质粒高度同源,丢失了质粒的菌株也随之丧失。肠致病性大肠杆菌EPEC是婴幼儿腹泻的主要病原菌,主要临床症状是发烧、呕吐、腹泻,粪便中含有大量粘液而无血,症状可持续两周以上,多引起社区的小型暴发。主要毒力因子包括50~70KD大质粒编码的束状菌毛
7、介导的粘附作用、噬菌体编码的志贺毒素及LEE毒力岛介导的A/E损伤。肠出血性大肠杆菌EHEC是指能引起出血性肠炎的一群大肠杆菌,包括、026:H11、0111:H8、O125:NM、O122:H19等血清型的部分菌株。目前认为EHEC的主要毒力因子有志贺毒素、致病性大质粒和LEE毒力岛。肠聚集性粘附大肠杆菌(EAggEC)EAggEC主要与小儿顽固性腹泻有关EAggEC产生束状菌毛(AFF/Ⅰ)和聚集性粘附大肠杆菌毒素Ⅰ(EASTⅠ)AFF/Ⅰ和EASTⅠ的基因位于60MD质粒上样品的采集与处理肠道外感染患者,应根据感染情况采取中段尿、
8、血液、脓液、脑脊液、胆汁等。食品样品采集后应尽快检验,易腐食品在检验之前应予冷藏。粪便标本一般采集1~3ml水样便或血样便,成形便约25g左右或用棉拭子采样,粪便标本应尽快送检,如运送时间超过2h,标本应放
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