1.1乙肝表面抗原检测操作规程

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1、标题：乙型肝炎病毒表面抗原检测（ELISA）版本号：A修订号：01文件编号：001发布日期：2011年11月30日生效日期：2011年11月30日发布部门：管理层编制人：审核人：批准人：乙型肝炎病毒表面抗原检测（ELISA）1原理：在微孔板上预包被被纯化的乙肝表面抗体（HBsAb），配以酶标记抗体（HbsAb-HRP）及TMB等其它试剂，采用夹心法原理检测人血清（或血浆）中乙肝表面抗原（HBsAg）。2试剂：2.1试剂名称：乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒（酶联免疫法）2.2试剂生产厂家：英科新创（厦门）科技有限公司2.3包装

2、规格：96Test/Kit2.4试剂盒组成：HbsAb预包被微孔板（包被HbsAb），HbsAg酶标抗体（含HRP标记HbsAb）,HbsAg阳性对照（含基因工程HbsAg），HbsAg阴性对照（正常人血清），HbsAg样品稀释液（含BSA缓冲液），浓缩洗涤液（PBS-T缓冲液），底物A（含H2O2），底物B（含TMB），终止液（含H2SO4），封板膜，自封袋，说明书。2.5试剂储存条件及有效期：2~8℃避光保存，有效12个月。3样本采集：取静脉血3-4ml于干净容器中分离出血清或血浆标本，如不及时测定可置于4℃冰箱保存，如

3、长期保存需置于-15至-20℃17标题：乙型肝炎病毒表面抗原检测（ELISA）版本号：A修订号：01文件编号：001发布日期：2011年11月30日生效日期：2011年11月30日发布部门：管理层编制人：审核人：批准人：冻存，并避免样本反复冻融。高脂血、高胆红素及溶血样本可能会影响试验结果的准确性，建议不使用。4所需仪器4.1全自动酶免分析仪4.2新鲜蒸馏水或去离子水4.3酶标仪（单波长450nm或双波长450nm/630nm）4.4微量移液器4.537℃恒温箱或水浴箱4.6洗板机或洗瓶5检验方法5.1平衡：将试剂盒各组分从

4、盒中取出，平衡至室温（18~25℃），微孔板板开封后，余者即时以自封袋封存。5.2配液：浓缩洗涤液配置前充分摇匀（如有晶体应充分溶解），浓缩洗涤液和蒸馏水去离子水按1：19稀释后使用。5.3编号：取所需数量微孔条固定于支架，按序编号。5.4稀释：每孔加入20ul样品稀释液。5.5加样：分别在相应孔中加入100ul阴、阳性对照血清或待测样本。5.6温育：置37℃温育60min。5.7加酶：分别在每孔中加入酶标记抗体50ul。5.8温育：置37℃温育30min。5.9洗涤：用洗涤液充分洗涤5次、洗涤后扣干（每次应保持30~60s

5、的浸泡时间）。17标题：乙型肝炎病毒表面抗原检测（ELISA）版本号：A修订号：01文件编号：001发布日期：2011年11月30日生效日期：2011年11月30日发布部门：管理层编制人：审核人：批准人：5.10显色：每孔加入底物A、B各50ul，轻拍混匀，37℃暗置30min。5.11终止：每孔加入终止液50ul，混匀。5.12测定：用酶标仪单波长450nm或双波长450nm/630nm测定各孔OD值（用单波长测定时，需用空白对照调零），并记录结果。6结果判定与分析临界值（C.O.）的计算：临界值=阴性对照孔OD平均值*2

6、.1；阴性对照OD均值小于0.05时以0.05计算。结果判定：样本OD值S/C.O.>=1者为HbsAg阳性样本OD值S/C.O.<1者为HbsAg阴性阴性对照均值>0.1或阳性对照均值<0.4时，实验无效，应重新试验。7质量控制每次试验用HBsAg的质控血清同步检测，S/CO值应在控制范围内；如失控，检查试剂校期、储藏温度、试验温度是否正常、操作步骤是否正确，直至从新试验使其在控。8参考范围阴性9临床意义在血清或血浆中HbsAg的存在表明有急性乙肝或慢性乙肝或为无症状携带者。10操作性能灵敏度为ng/ml，特异性高17标题

7、：乙型肝炎病毒表面抗原检测（ELISA）版本号：A修订号：01文件编号：001发布日期：2011年11月30日生效日期：2011年11月30日发布部门：管理层编制人：审核人：批准人：11方法的局限性11.1此方法仅适用于个体的血清或血浆样本的检测，不适合与混合血清或血浆样本及其他体液样本。11.2该方法仅作为定性检测乙型肝炎病毒表面抗原。11.3试剂盒中的阳性对照不能作为灵敏度的考核指标，阳性对照仅用于按照说明书步骤操作时，验证试剂盒中的组分是否有效。11.4由于方法学的局限性，本实验结果仅作为判断疾病的一项依据，如需对患者

8、进行确诊，建议施于其它检验手段予以确认。12注意事项12.1试验前请详细阅读试剂说明书，任何违反试剂说明书的使用或操作行为，都可能得到不准确的结果。12.2所有样本、试剂和各种废弃物应按传染物处理，严格防止交叉感染，严格健全和执行消毒隔离制度。对于含有传染病和怀疑含有传染源的物质，应有合适