仪器分析 荧光分析法

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1、I0IF第三节定量分析方法一、荧光强度与物质浓度的关系F=K’(I0-I)I=I010-ECLF=K’I0(1-10-ECL)=K’I0(1-e-2.3ECL)1e-2.3ECL=1+F=K’I0(1-10-ECL)=K’I0(1-e-2.3ECL)(-2.3ECL)11!+(-2.3ECL)22!F=K’I0[1-(1+(-2.3ECL)11!(-2.3ECL)22!++…)](-2.3ECL)33!+=K’I0[2.303ECl-(-2.3ECL)22!(-2.3ECL)33!-…]若C很小，ECl≤0.05则F=2.3K’I0ECl=

2、KC+…2F=2.3K’I0ECl=KCECl≤0.05FCECl>0.05F与C不成正比荧光法紫外法FA=-lgT=-lgI/I0荧光分析法的灵敏度高于紫外-可见分光光度法3二、定量分析方法标准曲线法比例法多组分分析C1C2C3C4C5100%2060804080%16486432用空白溶液调零用标准溶液调满刻度4比例法（对比法）若在某浓度范围中成线性，可用比例法测定CsCxFsFx=CxFsFx=CsCsCxFs-F0Fx-F0=CxFs-F0Fx-F0=Cs5多组分分析各组分荧光峰不重叠，可分别测定相互重叠，可利用荧光强度的加和性，

3、如：ba12Fa=KaCa+KbCb1:Fa’=Ka’Ca+Kb’Cb2:6第四节仪器与荧光分析新技术光源单色器样品池检测器单色器放大器显示器滤光片荧光计滤光片—单色器荧光分光光度计7仪器的校正灵敏度波长激发光谱和荧光光谱8荧光分析新技术简介1.激光荧光分析以激光作光源，谱线更纯、强度更大。可提高灵敏度和专一性。一次测量所需样品液<1g，可测至10-14~10-16g。新技术仪器方面更新化学方法改善92.时间分辨荧光time-resolvedfluorometry样品杂质脉冲激光10-10s10-12s103.同步荧光分析s

4、ynchronousfluorometry若：=em-exF=K’（ex）（em）CFexFemF=K’（ex）（ex+）Cf=fCF=K’（em-）（em）CK=KC11荧光黄、罗丹明6G、罗丹明B混合物的同步荧光光谱（=3nm）F荧光黄罗丹明6G罗丹明B124.胶束增敏荧光CH3(CH2)11OSO3-Na+非极性疏水基团极性亲水基团增加溶解度增加荧光效率增加荧光的稳定性13