《细胞工程sh》ppt课件

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1、3细胞工程学习目的了解制备植物细胞及微生物细胞的原生质体并进行细胞融合的基本方法。学习如何进行动植物细胞及组织的培养方法。认识单倍体植物的诱发及人工种子制备的基本要领。探讨植物脱除病毒的途径和检测手段。掌握利用动物体细胞克隆哺乳动物的基本做法及其重要意义。领会人类干细胞研究的原理和光明前景。3.1细胞工程的基础知识与基本技术细胞工程3细胞工程3.1.1基础知识原核细胞：DNA裸露，生长迅速，易于操作；但具细胞壁，表达真核基因受一定限制。真核细胞：接近人类需要，但具细胞周期，要同步化培养；生长慢，植物细胞和真菌细胞具细胞壁。3.1.2基本操作3.1.2.1无菌操作概念与技术×细胞工程3.1细胞

2、工程的基础知识与基本技术无菌室布局、卫生、消毒、超净台3.1.2.2细胞培养技术取样灭菌培养传代收获除菌取样3.1.2.3细胞融合技术原生质体融合筛选鉴定细胞工程3.1.2基本操作3.2植物细胞工程细胞工程3细胞工程植物组织培养悬浮细胞培养和次生代谢物生产花药及单倍体植株培养原生质体制备与细胞融合人工种子制备植物脱病毒技术3.2.1植物组织培养细胞工程3.2植物细胞工程在无菌和人工控制营养及环境条件下研究植物的细胞、组织和器官以及控制其生长、发育的技术。全世界通过植物细胞培养再生成植株已超过600种，已使许多具有重要经济价值的果树、药材、蔬菜和花卉等实现商品化生产。离体的植物器官、组织、细胞

3、脱分化愈伤组织再分化芽根植物体培养细胞工程3.2.1植物组织培养植物组培的基本过程细胞工程3.2.1植物组织培养选择合适的外植体外植体大小要适宜外植体的部位影响分化能力和器官分化类型外植体的年龄影响其分化率同一植物不同部位的分化需不同的生长素/激动素比例不同物种的相同部位外植体分化能力不一样3.2.1.1预备阶段细胞工程3.2.1植物组织培养除菌与接种自来水多次漂洗消毒剂处理无菌水反复冲洗外植体无菌滤纸吸干切割无菌外植体细胞工程3.2.1.1预备阶段小块外植体置培养基上培养消毒剂使用浓度/%清除消毒时间/min灭菌效果次氯酸钠2容易5~30很好次氯酸钙9~10容易5~30很好漂白粉饱和溶液容

4、易5~30很好升汞0.1~1较难2~10最好酒精70~75容易0.2~2好过氧化氢10~12最容易5~15好溴水1~2容易2~10很好硝酸银1较难5~30好抗生素4~50mg/L中等30~60较好常用消毒剂的使用和效果细胞工程3.2.1.1预备阶段基本组分微量无机物微量有机物琼脂细胞工程3.2.1.1预备阶段培养基配置添加较高浓度的生长素固体培养液体培养光照培养黑暗培养3.2.1.2诱导去分化阶段细胞工程3.2.1植物组织培养吲哚乙酸（IAA）,常用1～10mg/L吲哚丁酸（IBA）,常用1～5mg/L2，4-D（2，4-二氯苯氧乙酸），常用10-5～10-7mol/L萘乙酸（NAA），常用

5、1.0mg/L生长素类激素细胞工程3.2.1.2诱导去分化阶段细胞分裂素类激素激动素（KT）6-苄氨基嘌呤（6-BA）玉米素先加少量碱液预溶细胞工程3.2.1.2诱导去分化阶段3.2.1.3继代增殖阶段移植扩增分割继代细胞工程3.2.1植物组织培养光照培养室细胞工程3.2.1.3继代增殖阶段生长素与细胞分裂素对于细胞生长与分化具有协同作用，它们的量以及比例的不同，对细胞分化起着重要的作用。外植体本身内源激素水平的差异，导致它们分化时对培养基中所添加的这两种激素量及其比例反应不尽相同。3.2.1.4生根长芽阶段细胞工程3.2.1植物组织培养细胞工程3.2.1.4生根长芽阶段保湿是关键避免强光直

6、射温度适宜3.2.1.5移栽成活阶段细胞工程3.2.1植物组织培养手指玫瑰细胞工程3.2.1.5移栽成活阶段3.2.2植物细胞培养和次生代谢物生产细胞工程3.2植物细胞工程植物细胞培养罐产量物种天然产物细胞培养原植物橘叶鸡眼藤蒽醌900μg/g干重110μg/g干重决明蒽醌鲜重的0.334%种子干重的0.21%长春花蛇根碱干重的1.3%干重的0.26%三角叶薯蓣薯蓣皂苷26mg/g干重20mg/g干块根人参人参皂角苷鲜重的0.38%鲜重的0.3%~3.3%烟草烟碱干重的3.4%干重的2%~5%烟草泛醌0.5mg/g干重16mg/g干叶大红罂粟蒂巴因130mg/g干重140mg/g干叶细胞培养

7、和原植物的天然产物量的比较细胞工程3.2.2植物细胞培养和次生代谢物的生产氨基酸、核酸、蛋白质、碳水化合物、脂类、维生素、有机酸抗白血病药、抗肿瘤药、抗病毒药、抗微生物药、酶抑制剂色素、香料、甜味剂、鸦片、杀虫剂、激素、强心苷、核苷酸橡胶、阿司匹林、奎宁、可卡因从植物培养细胞中获得的各类物质细胞工程3.2.2植物细胞培养和次生代谢物的生产1.成批培养（封闭式培养）优点：易于操作；次生代谢物含量高。缺点：效率低