透析液内毒素检测操作SOP

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1、透析液及其回收率的测定革兰阴性菌脂多糖检测试剂盒（显色法）即碱处理法规范操作1.目的测定透析用水、透析液等样本内毒素含量，保证透析安全。同时对样品加入一定浓度的内毒素标准品进行回收率试验测定，保证试验结果的准确性。2.授权操作人经培训合格的微生物实验室检验人员。3.实验原理内毒素检测原理：革兰阴性菌脂多糖（内毒素）能激活反应主剂中的C因子、B因子、凝固酶原等，引起酶的级联反应，根据其引起的吸光度变化对革兰阴性脂多糖（内毒素）浓度进行定量测定。样品回收率试验测定原理：仪器配套的一次性器具软件分别计算出样品溶液及含标准

2、内毒素的样品溶液的内毒素含量Co和Ct，软件再自动按下式计算该试验条件下回收率R%。R%=(Ct－Co)/λ×100%其中Co为样品溶液内毒素实际测定值；Ct为含标准内毒素样品溶液的内毒素实际测定值；λ为样品溶液中加入的标准内毒素的浓度。4．产品性能指标4.1灵敏度0.01EU/ml4.2精密度批间CV≤10%。4.3准确性回收率75-125%。4.4标准曲线范围0.1EU-10EU/ml。4.5相关系数r绝对值≥0.980。5.实验组成5.1实验仪器及器具：MB-80微生物快速动态检测系统，配套软件：一次性器具检

3、测系统3.7X洁净工作台旋涡混合器加样器（5-50μl，20~200µl，100~1000µl）5.2实验耗材：无热原吸头(100µL、200µL、1000µL)无热原平底试管(塑料)无热源转移管无热原1.5mL离心管或一次性真空采血管（4ml或5ml）5.3实验试剂：内毒素标准品（冻干品），3EU/支内毒素检查用水试剂盒组成：反应主剂、主剂溶解液、处理液A、处理液B、质控品和质控品溶解液。其中透析液测定只需要反应主剂与主剂溶解液两种组分即可。6．工作环境相对湿度：20%~80%；温度控制：10~30℃；电源电压：

4、220V±10%，50Hz±2%。7.样本采集及处理7.1检测样本:R/O水、透析液、A原液、B原液等7.2采集要求：采样过程要求无菌操作，用专用的无热原转移管。7.3样品采集标准[1]7.3.1供试液的制备：浓缩液，直接取样成供试液；对干粉，称取样品5克，用细菌内毒素检查用水按使用说明配成浓缩液成供试液。取供试液按使用说明的比例混合，以细菌内毒素检查用水稀释后进行检测。[2]7.3.2用水标准应在透析装置和供水回路的连接处收集试样，取样点应在供水回路的末端或在混合室的入口处。7.3.3《血液透析器复用操作规范》透

5、析复用用水采样位置：应在血液透析器与复用系统连接处或尽可能接近此处进行水质检测。检测时间：最初应每周检测一次，连续两次检测结果符合要求后，内毒素检测应每3个月至少一次。7.3.4《血液净化标准操作规程（2010版）》透析用水的水质监控采样位置：反渗水输水管路的末端检测时间：透析用水内毒素检测至少每3个月1次。每台透析机每年至少检测1次。8.操作程序8.1打开仪器电源，预热30分钟，使仪器处于稳定状态（37℃）；8.2填写表头信息：“测定日期”默认为同电脑的系统时间相同“数据文件名”与“测定日期”相同，可以改动（注意

6、避免文件名重复）；“检验员”填写操作者姓名；“试剂批号”与试剂盒上的批号一致；（必填）“试剂灵敏度”的填写为0.01EU/ml；（必填）8.3填写样本基本信息要求回收率信息与样品信息完全一致。注意：填写标本名称、稀释倍数（如果标本名称一样，一定要区分开（如透析液1、透析液2），否则软件会自动计算2个标本结果的平均值）。8.4确认输入信息无误后，然后点击“采集”按钮。8.5样品内毒素的测定8.5.1取样品50μl加入无热原塑料平底试管中（不需要处理液的参与及加热及冷却过程，需要与血清试剂区分!）。8.5.2溶解反应主

7、剂，轻轻摇匀，避免剧烈震荡。EKT-2M：取0.6mL主剂溶解液溶解反应主剂；EKT-5M：取1.2mL主剂溶解液溶解反应主剂；EKT-12M：取2.8mL主剂溶解液溶解反应主剂；EKT-25M：取5.6mL主剂溶解液溶解反应主剂；8.5.3在已加入样本的平底试管中分别加入200µl溶解好的主剂，在漩涡振荡器上轻轻震荡震荡1-2s后，插入仪器孔道即可进行数据采集。8.6样品回收率的测定8.6.1将内毒素工作标准品溶解并稀释至0.5EU/ml。取3EU内毒素工作标准品，加入1000ul待测定样品溶液，放在振荡仪上振荡

8、5分钟，使之充分混合，即得3EU/ml内毒素标准品溶液。取100ul上述3EU/ml内毒素标准品溶液与500ul待测定样品溶液，震荡混匀一分钟，得到0.5EU/ml的内毒素标准品样本溶液。8.6.2样品回收率的检测，与主剂反应取0.5EU/ml的内毒素标准品样本溶液50ul加入无热原塑料平底试管中（不需要处理液的参与及加热及冷却过程，，需要与血清试剂区分!）