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时间:2019-07-19
《透析液内毒素检测操作SOP》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、透析液及其回收率的测定革兰阴性菌脂多糖检测试剂盒(显色法)即碱处理法规范操作1.目的测定透析用水、透析液等样本内毒素含量,保证透析安全。同时对样品加入一定浓度的内毒素标准品进行回收率试验测定,保证试验结果的准确性。2.授权操作人经培训合格的微生物实验室检验人员。3.实验原理内毒素检测原理:革兰阴性菌脂多糖(内毒素)能激活反应主剂中的C因子、B因子、凝固酶原等,引起酶的级联反应,根据其引起的吸光度变化对革兰阴性脂多糖(内毒素)浓度进行定量测定。样品回收率试验测定原理:仪器配套的一次性器具软件分别计算出样品溶液及含标准
2、内毒素的样品溶液的内毒素含量Co和Ct,软件再自动按下式计算该试验条件下回收率R%。R%=(Ct-Co)/λ×100%其中Co为样品溶液内毒素实际测定值;Ct为含标准内毒素样品溶液的内毒素实际测定值;λ为样品溶液中加入的标准内毒素的浓度。4.产品性能指标4.1灵敏度0.01EU/ml4.2精密度批间CV≤10%。4.3准确性回收率75-125%。4.4标准曲线范围0.1EU-10EU/ml。4.5相关系数r绝对值≥0.980。5.实验组成5.1实验仪器及器具:MB-80微生物快速动态检测系统,配套软件:一次性器具检
3、测系统3.7X洁净工作台旋涡混合器加样器(5-50μl,20~200µl,100~1000µl)5.2实验耗材:无热原吸头(100µL、200µL、1000µL)无热原平底试管(塑料)无热源转移管无热原1.5mL离心管或一次性真空采血管(4ml或5ml)5.3实验试剂:内毒素标准品(冻干品),3EU/支内毒素检查用水试剂盒组成:反应主剂、主剂溶解液、处理液A、处理液B、质控品和质控品溶解液。其中透析液测定只需要反应主剂与主剂溶解液两种组分即可。6.工作环境相对湿度:20%~80%;温度控制:10~30℃;电源电压:
4、220V±10%,50Hz±2%。7.样本采集及处理7.1检测样本:R/O水、透析液、A原液、B原液等7.2采集要求:采样过程要求无菌操作,用专用的无热原转移管。7.3样品采集标准[1]7.3.1供试液的制备:浓缩液,直接取样成供试液;对干粉,称取样品5克,用细菌内毒素检查用水按使用说明配成浓缩液成供试液。取供试液按使用说明的比例混合,以细菌内毒素检查用水稀释后进行检测。[2]7.3.2用水标准应在透析装置和供水回路的连接处收集试样,取样点应在供水回路的末端或在混合室的入口处。7.3.3《血液透析器复用操作规范》透
5、析复用用水采样位置:应在血液透析器与复用系统连接处或尽可能接近此处进行水质检测。检测时间:最初应每周检测一次,连续两次检测结果符合要求后,内毒素检测应每3个月至少一次。7.3.4《血液净化标准操作规程(2010版)》透析用水的水质监控采样位置:反渗水输水管路的末端检测时间:透析用水内毒素检测至少每3个月1次。每台透析机每年至少检测1次。8.操作程序8.1打开仪器电源,预热30分钟,使仪器处于稳定状态(37℃);8.2填写表头信息:“测定日期”默认为同电脑的系统时间相同“数据文件名”与“测定日期”相同,可以改动(注意
6、避免文件名重复);“检验员”填写操作者姓名;“试剂批号”与试剂盒上的批号一致;(必填)“试剂灵敏度”的填写为0.01EU/ml;(必填)8.3填写样本基本信息要求回收率信息与样品信息完全一致。注意:填写标本名称、稀释倍数(如果标本名称一样,一定要区分开(如透析液1、透析液2),否则软件会自动计算2个标本结果的平均值)。8.4确认输入信息无误后,然后点击“采集”按钮。8.5样品内毒素的测定8.5.1取样品50μl加入无热原塑料平底试管中(不需要处理液的参与及加热及冷却过程,需要与血清试剂区分!)。8.5.2溶解反应主
7、剂,轻轻摇匀,避免剧烈震荡。EKT-2M:取0.6mL主剂溶解液溶解反应主剂;EKT-5M:取1.2mL主剂溶解液溶解反应主剂;EKT-12M:取2.8mL主剂溶解液溶解反应主剂;EKT-25M:取5.6mL主剂溶解液溶解反应主剂;8.5.3在已加入样本的平底试管中分别加入200µl溶解好的主剂,在漩涡振荡器上轻轻震荡震荡1-2s后,插入仪器孔道即可进行数据采集。8.6样品回收率的测定8.6.1将内毒素工作标准品溶解并稀释至0.5EU/ml。取3EU内毒素工作标准品,加入1000ul待测定样品溶液,放在振荡仪上振荡
8、5分钟,使之充分混合,即得3EU/ml内毒素标准品溶液。取100ul上述3EU/ml内毒素标准品溶液与500ul待测定样品溶液,震荡混匀一分钟,得到0.5EU/ml的内毒素标准品样本溶液。8.6.2样品回收率的检测,与主剂反应取0.5EU/ml的内毒素标准品样本溶液50ul加入无热原塑料平底试管中(不需要处理液的参与及加热及冷却过程,,需要与血清试剂区分!)
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