ut对pq中毒后损伤肺成纤维细胞的修复作用研究

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1、姓名：谢永鹏乌司他丁对百草枯中毒后损伤肺成纤维细胞的修复作用研究内容介绍研究背景123预计结果与展望4立项依据与创新实验技术及过程研究背景-百草枯简介百草枯(paraquat,PQ)，20%，250mL装；是一种有机杂环类广谱非选择性接触性除草剂及脱叶剂。PQ对人畜具有较强毒性，人口服致死量约为1～3g。中毒后致急性肺损伤及肺纤维化改变为其特异表现缺少特效解毒剂和能够在血液或组织中与PQ结合的螯合剂，PQ中毒的病死率高达60%～80%。研究背景-乌司他丁简介乌司他丁(Ulinastain,UT)，本品是从健康成年男性新鲜尿液中分离纯化出来的一种糖蛋白，由143个氨基酸组成，相对分子质量约67

2、00。本品属蛋白酶抑制剂，对胰蛋白酶、α-糜蛋白酶等丝氨酸蛋白酶及粒细胞弹性蛋白酶、透明质酸酶、巯基酶、纤溶酶等多种酶有抑制作用。另具有稳定溶酶体膜，抑制溶酶体酶的释放，抑制心肌抑制因子（MDF）产生，清除氧自由基及抑制炎症介质释放的作用。研究背景-肺成纤维细胞正常情况下，MRC-5存在精确调控，分泌的细胞外基质（ECM）处于动态平衡。胶原蛋白是主要的ECM蛋白，占肺干重1/5（Ⅰ、Ⅲ）。肺损伤后，MRC-5及胶原蛋白过度合成，参与病理修复。胶原蛋白的生成和沉积将导致肺纤维化肺成纤维细胞炎症介质百草枯细胞因子力学刺激缺氧肺成纤维细胞研究背景-结缔组织生长因子（CTGF）CTGF属于TGF-β

3、家族，作为TGF-β的下游因子，主要促进细胞增殖、粘附，ECM异常沉淀早期即刻蛋白，主要表达于活化的肺纤维细胞，见于肺纤维变性早期，晚期极弱。可作为纤维化病变早期诊断标志物。促纤维化作用呈剂量依赖，可被抗CTGF抗体拮抗。研究背景-细胞力学特性力学特性（粘弹性）是细胞的一种本质属性，细胞所处的生理/病理状态、组织环境和力环境不同，所表现的力学特性也不尽相同。解释一些组织器官的生理、病理变化以及解释疾病的发病与治疗机理等具有重要的意义。目前为止，国内外尚未见有关百草枯中毒过程中肺成纤维细胞生物力学特性变化的报道。前期工作课题组在这方面已有一定的工作基础。部分工作人员，曾在吉林省科技发展计划项目

4、（20100138）百草枯致中毒性肺纤维化发病机理的力学生物学研究的支持下，研究了百草枯致中毒后短时间内肺成纤维细胞的CTGF的表达、细胞增殖情况及细胞粘弹性的变化等，实验结果表明百草枯影响了细胞的生物学特性和生物力学特性。并已发表文章2篇。1.GuohuiWang，YongpengXie，DanShi，NanZhang.TheEffectsofmechanicalstimulationonproliferationandCTGFexpressionofhumanlungfibroblast.The4thInternationalConferenceonImageandSignalProce

5、ssing,(2011年10月发表，EI收录)2.GuohuiWang，YongpengXie，NanZhang.TheStudyofCTGFExpressionofLungFibroblastsAfterTreatedbyParaquat，第十六届亚太呼吸年会.(2011年11月发表，SCI收录)人胚肺成纤维细胞MRC-5Olympus倒置相差显微镜:培养皿中细胞正常生长，形态呈长梭形。百草枯处理前后MRC-5细胞显微图片A：正常MRC-5细胞B：50mg/LPQ培养液处理后C：100mg/LPQ培养液处理后D：200mg/LPQ培养液处理后PQ对MRC-5CTGF表达的影响各组细胞CTG

6、F浓度比较（*P<0.05）PQ对MRC-5生物力学特性影响肺成纤维细胞在30mm水柱负压下吸入长度随时间变化情况PQ对MRC-5生物力学特性影响经过PQ处理后MRC-5细胞的粘弹性各项参数均明显小于正常MRC-5细胞也就是说经过PQ处理后的MRC-5生物力学特性降低，变得较“软”在经过100mg/L和200mg/L百草枯处理后MRC-5粘弹性要小于50mg/L而100mg/L和200mg/L百草枯处理组之间细胞的粘弹性无明显差异各组细胞粘弹性参数比较实验目的通过实验研究乌司他丁对百草枯中毒后损伤肺成纤维细胞的修复作用，得到乌司他汀对百草枯致肺损伤的治疗效果及治疗原理。实验内容应用乌司他汀注

7、射液处理经不同浓度百草枯损伤的肺成纤维细胞，检测细胞CTGF的表达及细胞的粘弹性，说明乌司他汀对百草枯中毒后损伤肺成纤维细胞的修复作用，研究乌司他汀对百草枯致肺损伤的治疗效果并解释其治疗原理。试验器材仪器及材料细胞：人胚肺成纤维细胞MRC-5，中科院细胞库。试剂：胎牛血清培养基、胰蛋白酶、CTGFELISA试剂盒。主要仪器：二氧化碳培养箱、高低速离心机、微管吸吮系统、流式细胞仪、ELx-800NB酶标仪及配套