dna重组技术的基本工具王京礼

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1、知识回顾1、限制性核酸内切酶：准确切割DNA；DNA连接酶：将DNA片段再连接起来；运载体：运输工具，将体外重组好的DNA导入受体细胞。基因工程需要的工具有限制酶、DNA连接酶和运载体；需要的工具酶是限制酶、DNA连接酶。2、限制性核酸内切酶又称限制酶，其主要从原核生物中分离出来，能够识别特定的核苷酸序列，并在特定的部位进行切割。其作用部位为两个核苷酸之间的磷酸二酯键，形成黏性末端和平末端。3、DNA连接酶是将DNA片段连接起来，恢复被限制酶切割开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键。根据酶的来源不同，可分为从大肠杆菌中分离出来的E·coliDNA连接酶和

2、从T4噬菌体中分离出来的T4DNA连接酶，前者只能连接黏性末端，后者既可以连接黏性末端也可以连接平末端，但连接平末端的效率比较低。4、将外源（目的）基因送入受体细胞的载体有质粒、λ噬菌体的衍生物、动植物病毒，常用质粒作为运载体，具有以下特点：（1）能自我复制（2）具有一个或多个限制酶切割位点，便于外源基因插入（3）具有标记基因，可以鉴定目的基因是否进入受体细胞。专题一　基因工程1.1DNA重组技术的基本工具学习目标1、简述DNA重组技术所需三种基本工具的作用2、总结基因工程运载体需要具备的条件3、模拟制作DNA重组分子，培养学生合作、动手能力4、认

3、同基因工程的诞生和发展离不开理论研究和技术创新预习反馈1、问题（1）三种工具及作用表述不确切（如分子运输车：质粒；限制酶：切割DNA分子，获取目的基因）（2）质粒的特点总结不全面2、表扬王福香、李浩、田雨、陈玉洁、刘荣、张慧君、赵伟、郑华涛、孙翰卿、徐小磊、孙希凯、任锡昌、张嘉楠、祝丽超、许玉萍、戴晶晶、王跃鹏、王天宇、刘丽庆××合作探究展示点评1、2、（1）②2、（2）②2、（3）⑤反思总结一组二组三组四组五组六组EcoRI（在G和A之间切割）Smal（在G和C之间切割）黏性末端平末端同一种限制酶切割后形成的两个末端是什么关系？反向重复序列练习以

4、下是四种不同限制酶切割形成的DNA片段：…CTGCA  (2)…AC  (3)GC…（4）…G…G…TG  CG……CTTAA(5)G… (6)…GC(7)GT…  (8)AATTC…ACGTC…     …CG       CA…   G…请用DNA连接酶将它们连接起来:____和____能连接;____和____能连接;____和____能连接;____和____能连接。2和7；3和6；4和8；1和5…GAATTCCGTAGAATTCGGATT……CTTCATGAATTCCCTAA……GAAGTACTTAAGGGATT……CTTAAGGCATC

5、TTAAGCCTAA…CTTCATGAATTCCCTAA…GAAGTACTTAAGGGATT…GGCATCTTAAAATTCCGTAG含目的基因的DNA片段运载体DNA片段重组DNA分子片段EcoRIEcoRI模拟制作一、基因工程的概念.二、DNA重组技术的基本工具1.限制性核酸内切酶---“分子手术刀”2.DNA连接酶---“分子缝合针”3.运载体——“分子运输车”本课小结：分类作用来源作用特点结果种类作用特点条件