毕业论文--荧光原位杂交技术(FISH)及其在植物分子细胞遗传学中的应用与展望

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1、-7-荧光原位杂交技术(FISH)及其在植物分子细胞遗传学中的应用与展望荧光原位杂交技术(FISH)及其在植物分子细胞遗传学中的应用与展望摘要：荧光原位杂交是在分子水平上检测外源染色质的一种有效方法。该技术在研究植物分子细胞遗传学、基因扩增、基因作图及植物进化和亲缘关系的鉴定上已广泛应用。本文简要介绍了荧光原位杂交探针类型、探针标记方法和染色体制片技术等，概述了荧光原位杂交技术在构建植物基因组物理图谱，功能基因定位，远缘杂种的鉴定及外源染色质的检测，减数分裂时期染色体行为研究和探讨种的起源中的应用与展望。关键词：荧光原位杂交技术；外源染色质的检测；染色体行为；

2、种的起源þ中图分类号：S566.1þ文献标识码：Aþ文章编号：1005-9695þApplicationsandProspectsofFluorescenceinsituHybridizationonPlantMolecularCytogeneticsAbstract:Fluorescenceinsituhybridization(FISH)isamosteffectivemethodofdetectingalienchromatinatmolecularlevel.Itplaysanincreasingimportantroleinavarietyofres

3、earchfields,suchasplantmolecularcytogenetics,geneamplification,genemapping,evolutionandidentificationoftherelationshipsofdifferentspecies.Inthispaper,theprobesusedinthistechnique,probeslabelmethodsandchromosomepreparationwereintroduced.TheapplicationofFISHinplantgenomicphysicalatlas

4、estimation,functionalgenelocation,fordistanthybrididentificationandalienchromatindetection,analysisofchromosomebehaviorinmeiosis,originationofspeciesaresummarizedandprospected.Keywords:Fluorescenceinsituhybridization(FISH);Exoqenouschromatindetection;Chromosomesbehaviour;originofspe

5、cies.1荧光原位杂交技术介绍荧光原位杂交技术(Fluorescenceinsituhybridization,FISH)始于20世纪70年代[1]，其原理是：DNA或RNA序列首先被报告分子(Reportermolecules)标记，通过原位杂交使荧光分子沉积在特定DNA序列位点的染色质上，在探针杂交位点便可见不连续的荧光信号。该技术的应用扩展了生物学研究的领域。荧光原位杂交广泛被运用，主要是由于以下几方面的原因：①FISH的灵敏度接近同位素标记探针杂交[2-3]，在安全性，空间分辨率，速度和探针的稳定性等比放射性同位素标记探针杂交更具优越性；②运用不同荧

6、光色素标记的探针可同时检测一个细胞核中2种或更多的核甘酸序列；③DNA序列能被定位在目标范围从载玻片上分散的中期细胞染色体到悬浮固定保存细胞三维结构的间期核中[4]；④探针标记和荧光试剂从商业上可得，而且使FISH过程直接可靠；⑤荧光显微镜和数字成像系统在过去20多年中不断改进；⑥特殊种属的全基因组，完整染色体，染色体亚区域或单拷贝序列能在多种探针混合运用情况下出现特异信号；⑦未标记的基因组DNA通过探针预杂交抑制重复序列，对定位象柯斯质粒这样一类含大插入探针的特定序列是至关重要的。随着FISH技术的不断发展，衍生了染色体原位抑制(CISS)技术、间期核FIS

7、H、引物原位标记或DNA合成(PRINS)技术等，并且发展出M-FISH、3D-FISH、Rx-FISH技术、CGH以及近年来微阵列技术(Microarray)等。同时，原位杂交靶目标从中期染色体发展到DNA纤维，提高了FISH技术的分辨率，即2个不同DNA探针能够被检测到的最小距离，由1Mb发展到1-7-荧光原位杂交技术(FISH)及其在植物分子细胞遗传学中的应用与展望kb，这更进一步拓展了FISH技术的应用领域，成为分子细胞遗传学的一项代表技术。本文主要介绍了荧光原位杂交探针类型、探针标记方法的发展、染色体制片技术的发展等，综述了荧光原位杂交技术在植物分子

8、细胞遗传学方面的应用与展望。2原位杂交