发酵灭菌及染菌防治

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1、第三章发酵灭菌及染菌防治第一节发酵染菌的危害发酵染菌能给生产带来严重危害，防止杂菌污染是任何发酵工厂的一项重要工作内容。尤其是无菌程度要求高的液体深层发酵，污染防止工作的重要性更为突出。所谓“杂菌”，是指在发酵培养中侵入了有碍生产的其他微生物。几乎所有的发酵工业，都有可能遭受杂菌的污染。染菌的结果，轻者影响产量或产品质量，重者可能导致倒罐，甚至停产。一、染菌对不同品种发酵的影响青霉素疫苗柠檬酸谷氨酸肌苷、肌苷酸酶制剂二、不同种类的杂菌对发酵的影响青霉素发酵：污染细短产气杆菌比粗大杆菌的危害大链霉素发酵：污染细短杆菌、假单孢杆菌和产气杆菌比粗大杆菌的危害大四环素发酵：污

2、染双球菌、芽孢杆菌和夹膜杆菌的危害较大柠檬酸发酵：污染青霉菌肌苷、肌苷酸发酵：污染芽孢杆菌的危害最大谷氨酸发酵：污染噬菌体高温淀粉酶发酵：污染芽孢杆菌和噬菌体的危害较大三、不同染菌时间对发酵的影响种子培养期染菌：菌体浓度低、培养基营养丰富发酵前期染菌：杂菌与生产菌争夺营养成分，干扰生产菌的繁殖和产物的形成发酵中期染菌：严重干扰生产菌的繁殖和产物的生成发酵后期染菌：如杂菌量不大，可继续发酵。如污染严重，可采取措施提前放罐四、不同染菌途径对发酵的影响种子带菌：种子带菌可使发酵染菌具有延续性空气带菌：空气带菌也使发酵染菌具有延续性，导致染菌范围扩大至所有发酵罐培养基或设备灭

3、菌不彻底：一般为孤立事件，不具有延续性设备渗漏：这种途径造成染菌的危害性较大五、染菌对产物提取和产品质量的影响对过滤的影响：发酵液的粘度加大菌体大多自溶由于发酵不彻底，基质的残留浓度增加造成的后果：过滤时间长，影响设备的周转使用，破坏生产平衡大幅度降低过滤收率对提取的影响有机溶剂萃取工艺：染菌的发酵液含有更多的水溶性蛋白质，易发生乳化，使水相和溶剂相难以分开离子交换工艺：杂菌易粘附在离子交换树脂表面或被离子交换树脂吸附，大大降低离子交换树脂的交换量对产品质量的影响对内在质量的影响：染菌的发酵液含有较多的蛋白质和其它杂质。对产品的纯度有较大影响。对产品外观的影响：一些染

4、菌的发酵液经处理过滤后得到澄清的发酵液，放置后会出现混浊，影响产品的外观。六、染菌对三废处理的影响使过滤后的废菌体无法利用发酵染菌的废液，生物需氧量（BOD）增高，增加三废治理费用和时间七、发酵染菌的危害直接经济损失间接经济损失第二节发酵过程中染菌的检查判断一、杂菌的检查方法目前生产上常用的杂菌检查方法有：①显微镜检查：染色镜检②平板划线检查：到平板空培养待测样品划线培养观察③酚红肉汤培养检查：无菌肉汤培养基空培养接入样品培养观察判断发酵是否染菌应以无菌试验结果为根据无菌试验的目的：1.监测培养基、发酵罐及附属设备灭菌是否彻底2.监测发酵过程中是否有杂菌从外界侵入3.

5、了解整个生产过程中是否存在染菌的隐患和死角二、各种检查方法的比较显微镜检查方法简便、快速，能及时发现杂菌，但由于镜检取样少，视野的观察面也小，因此不易检出早期杂菌。平板划线法和肉汤培养方法的缺点是需经较长时间培养(一般要过夜)才能判断结果，且操作较繁琐，但它要比显微镜能检出更少的杂菌，而且结果也更为准确三杂菌检查中的问题检查结果应以平板划线和肉汤培养结果为主要根据平板划线和肉汤培养应做三个平行样要定期取样酚红肉汤和平板划线培养样品应保存至放罐后12小时，确定为无菌时方可弃去取样时防止外界杂菌混入的措施四、检查的工序和时间选择那些生产工序和时间的样品检查也是十分重要的问

6、题。科学合理的选择检查工序和时间，对于除去已污染杂菌的物料，避免下道工序再遭染菌，有着直接的指导意义。有时即使由于检查时间较长，未能及时据导本批生产，但对于找出造成染菌事故的环节，分析染菌原因，杜绝染菌漏洞也是不可缺少的。由于生产菌种相产品的不同，检查的时间也不完全一样：但总的原则是一致的，即每个工序或经一定时间都应进行取样检查。发酵过程的杂菌检查除了以上的方法外，在实际生产中还可以根据以下参数的异常变化来判断是否染菌溶解氧pH值尾气中CO2含量第三节发酵染菌率和染菌原因的分析一、发酵染菌率总染菌率：指一年内发酵染菌的批次与总投料批次数之比乘以100得到的百分率设备染

7、菌率：统计发酵罐或其他设备的染菌率，有利于查找因设备缺陷而造成的染菌原因不同品种发酵的染菌率：统计不同品种发酵的染菌率，有助于查找不同品种发酵染菌的原因不同发酵阶段的染菌率：将整个发酵周期分成前期、中期和后期三个阶段，分别统计其染菌率。有助于查找染菌的原因。季节染菌率：统计不同季节的染菌率，可以采取相应的措施制服染菌。操作染菌率：统计操作工的染菌率，一方面可以分析染菌原因，另一方面可以考核操作工的灭菌操作技术水平。二、染菌原因的分析避免在发酵生产中污染杂菌应以预防为主。“防重于治”，事前防止胜于事后挽救。如果一旦发生染菌现象就要尽快找出原因及时纠正、