工业发酵染菌的防治l

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1、第七章染菌的防治一、染菌的影响所谓“杂菌”,是指在发酵培养中侵入了有碍生产的其他微生物。发酵过程污染杂菌,会严重的影响生产,是发酵工业的致命伤。造成大量原材料的浪费,在经济上造成巨大损失影响产品外观及内在质量扰乱生产秩序,破坏生产计划。遇到连续染菌,特别在找不到染菌原因往往会影响人们的情绪和生产积极性。1、染菌对不同产品发酵的影响放线菌由于生长的最适pH为7左右,染细菌较多;霉菌生长pH为5左右,因此染酵母菌为多。青霉素发酵染菌,绝大多数杂菌都能直接产生青霉素酶,另一些杂菌则可被青霉素诱导而产生青霉素酶。不论

2、在发酵前期、中期或后期,染有能产生青霉素酶的杂菌,都能使青霉素迅速破坏。链霉素、四环素、红霉素、卡那霉素等发酵染菌也会造成不同程度的危害。如杂菌大量消耗营养干扰生产菌的正常代谢;改变pH,降低产量。疫苗生产危害很大。现在疫苗多采用深层培养,有些疫苗是不加提纯而直接使用的产品,在其深层培养过程中,一旦污染杂菌,不论死菌、活菌或内外毒素,都应全部废弃。因此,发酵罐容积越大,污染杂菌后的损失也越大。(一)染菌对发酵的影响2、污染不同种类和性质的微生物的影响(1)污染噬菌体噬菌体的感染力很强,传播蔓延迅速,也较难防治

3、,故危害极大。污染噬菌体后,可使发酵产量大幅度下降,严重的造成断种,被迫停产。(2)污染其它杂菌有些杂菌会使生产菌自溶产生大量泡沫,即使添加消泡剂也无法控制逃液,影响发酵过程的通气搅拌。有的杂菌会使发酵液发臭、发酸,致使pH下降,使不耐酸的产品破坏。特别是染芽孢杆菌,由于芽孢耐热,不易杀死,往往一次染菌后会反复染菌。不同发酵对杂菌感染的敏感性不同(1)青霉素和链霉素:细短杆菌的危害大;(2)四环素:对双球菌、芽孢杆菌和荚膜杆菌污染敏感;(3)柠檬酸:对青霉菌敏感;(4)核苷酸:对芽孢杆菌敏感(5)氨基酸:对噬

4、菌体敏感;3、不同时间染菌对发酵的影响污染时间是指用无菌检测方法确定的污染时间,不是杂菌窜入培养液的时间。(1)种子培养期染菌。由于接种量较小,生产菌生长一开始不占优势。此时防御杂菌能力低,容易污染杂菌,对发酵影响最大。如在此阶段染菌,应将种子液全部废弃。(2)发酵前期染菌。发酵前期最易染菌,且危害极大。原因发酵前期菌量不很多,与杂菌没有竞争优势;且还未合成产物(抗生素)或产生很少,抵御杂菌能力弱。措施可以用降低培养温度,调整补料量,用酸碱调pH值,缩短培养周期等措施予以补救。如果前期染菌,且培养基养料消耗不

5、多,可以重新灭菌,补加一些营养,重新接种再用。(3)发酵中期染菌。发酵中期染菌会严重干扰产生菌的代谢。杂菌大量产酸,培养液pH下降;糖、氮消耗快,发酵液发粘,菌丝自溶,产物分泌减少或停止,有时甚至会使已产生的产物分解。有时也会使发酵液发臭,产生大量泡沫。措施降温培养,减少补料,密切注意代谢变化情况。如果发酵单位到达一定水平可以提前放罐,或者抗生素生产中可以将高单位的发酵液输送一部分到染菌罐,抑制杂菌。(4)发酵后期染菌。发酵后期发酵液内已积累大量的产物(如果是抗生素),对杂菌有一定的抑制或杀灭能力。因此如果染

6、菌不多,对生产影响不大。如果染菌严重,又破坏性较大,可以提前放罐。1、发酵染菌对过滤的影响染菌的发酵液一般发粘,菌体多数自溶,所以在发酵液过滤时不能或很难形成滤饼,导致过滤困难。由于过滤困难,过滤时间拉长,影响发酵液储罐和过滤设备的周转使用,破坏了生产平衡。染菌发酵液还会因过滤困难而大幅度降低过滤收率,直接影响提炼总收率。措施:加热、冷却、添加助滤剂等2、发酵染菌对提炼的影响染菌发酵液中含有比正常发酵液更多的水溶性蛋白和其它杂质。采用沉淀法,杂质污染产物。采用有机溶剂萃取的提炼工艺,则极易发生乳化,很难使水相

7、和溶剂相分离,影响进一步提纯。采用直接用离子交换树脂的提取工艺,如链霉素、庆大霉素,染菌后大量杂菌黏附在离子交换树脂表面,或被离子交换树脂吸附,大大降低离子交换树脂的交换容量,而且有的杂菌很难用水冲洗干净,洗脱时与产物一起进入洗脱液,影响进一步提纯。(二)发酵染菌对提炼和产品质量的影响2染菌的表现种子:生长缓慢、菌丝结团、代谢异常发酵:菌体生长差、pH异常、溶氧异常、泡沫过多、菌体浓度异常(一)发酵染菌的检查判断表观法:溶氧水平、排气中CO2实验法:镜检法、平皿划线或斜面检查法、肉汤培养法二、染菌的原因日本工

8、业技术院发酵研究所多年来抗生素发酵染菌原因分析项目百分率%种子带菌或怀疑种子带菌9.64接种时罐压跌零0.19培养基灭菌不透0.79总空气系统有菌19.96泡沫冒顶0.48夹套穿孔12.36盘管穿孔5.89接种管穿孔0.39阀门渗漏1.45搅拌轴密封渗漏2.09罐盖漏1.54其它设备渗漏10.13操作原因10.15原因不明24.94(二)染菌原因上海第三制药厂染菌原因分析项目百分率%种子带菌14.1

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