欢迎来到天天文库
浏览记录
ID:39871054
大小:43.01 KB
页数:3页
时间:2019-07-13
《直接抗人球蛋白试验操作规程》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、XXX医院直接抗人球蛋白试验操作规程1.目的保证试验结果的准确性,确保临床输血安全。2.适用范围XXX医院输血科。3.职责输血科具有专业技术的工作人员负责本院患者直接抗人球蛋白检测,但只对该单份标本负责。4.相关文件试剂采购、保存和使用管理程序设备采购、使用管理程序消毒与清洁管理程序标本采集、运输、保存和报废管理程序5.相关记录仪器设备的采购、使用和维护记录仪器的温度记录恒温水温箱的换水和消毒记录消毒液的配置记录清洁消毒记录试剂采购、使用记录标本交接和报废记录6.实验原理抗球蛋白试验(Coombs试验)是测定结合在红细胞上的抗体和/或补体的主要方法。直接Coombs试验是检测体内已被抗
2、体和/或补体致敏的红细胞。间接Coombs试验时通过血清与细胞的孵育,证实抗体和/或补体在体外的结合。抗体分子和补体成分都是球蛋白。用人球蛋白免疫动物使其产生抗体即抗人球蛋白。抗人球蛋白试剂可凝集被人球蛋白致敏的红细胞。抗人球蛋白试剂可以和致敏在红细胞上的人球蛋白反应,通过桥梁作用使致敏红细胞出现凝集,呈现阳性反应。7.仪器设备玻璃试管(75X12mm)、玻片、记号笔、一次性塑料滴管、显微镜、交叉配血专用离心机、试管架、恒温水温箱、试剂保存冰箱、标本保存冰箱。8.试剂生理盐水、抗D(IgG)试剂(效价≧1:8),直接抗人球蛋白试剂(抗IgG,C3d),均为有合格证件的正品。39.试剂保
3、存和性能指标9.1.保存:直接抗人球蛋白试剂(抗IgG,C3d)应置于2~8℃冷藏保存,切勿反复冻融。储存条件下有效期为24个月。9.2.性能指标:直接抗人球蛋白试剂(抗IgG,C3d)为多特异性试剂。外观:应澄清透明,无杂质;灵敏度试验:分别与强抗体[抗D(IgG)],中等强度抗体(抗Jka)和弱抗体(抗Fya)致敏细胞反应,结果均为阳性。效价:与IgG(抗D)致敏细胞凝集效价≧1:4;与C3致敏细胞凝集效价≧1:1。特异性试验:阴性对照试验——与加入AB血浆的Rh(D)阳性细胞反应,结果为阴性;阳性对照试验——与抗D(IgG)致敏细胞反应,结果为阳性。10.标本收集和处理①应使用E
4、DTA抗凝标本,可反映体内红细胞被补体致敏的真实情况。②若怀疑冷抗体引起的直接抗球蛋白试验阳性,其血液标本凝固应保持在37℃,直到血清被分离出来为止。11.实验方法与步骤①用生理盐水制备受检者3%红细胞悬液备用。②将1滴受检者3%红细胞悬液加入干净的试管中,用生理盐水洗涤3次[3400转/分钟(1000g),每次离心1分钟,离心后将上清液全部倒出]。③加入2滴抗IgG,C3d,以3400转/分钟(1000g)离心15秒。④将取出的试管持一定角度并轻轻摇动直至松动所有的细胞,然后反复倾斜试管,直至呈现均匀的细胞悬液(阴性)或凝集物(阳性)为止。⑤用肉眼或借助光学显微镜观察凝集情况,并按凝
5、集程度进行初步判读结果并记录。⑥若初步判读结果为阴性,则在室温中放置5~10分钟,再离心一次,重新判读结果并记录。⑦阳性对照试验(IgG抗D致敏细胞):将1滴阳性对照细胞加入干净的试管中;再加入2滴直接抗人球蛋白试剂(抗IgG,C3d);以3400转/分钟(1000g)离心15秒;将取出的试管持一定角度并轻轻摇动直至松动所有的细胞,然后反复倾斜试管,直至呈现均匀的细胞悬液(阴性)或凝集物(阳性)为止;再进行初步结果判读。对初判为阴性结果的,再在试管中加入1滴阳性对照细胞,进行再离心、再悬浮和再判读结果。如果在制备阳性对照细胞悬液时,能充分去除所有未结合的球蛋白,则此步对照试验结果为阳性
6、。(此步对照很关键,它是检测细胞是否洗涤充分的唯一方法。)3⑧阳性对照细胞(IgG抗D致敏细胞)制备:取1份市售抗D(IgG)试剂(效价≧1:8),加入1份Rh(D)阳性O型红细胞,混匀后置37℃水浴30分钟,再用生理盐水洗涤3次[3400转/分钟(1000g),每次离心1分钟,离心后将上清液全部倒出],最后配成3%红细胞悬液备用。12.结果判断出现红细胞凝集为阳性反应,表示红细胞上有相应抗体存在;红细胞不凝集为阴性反应,表示红细胞上没有相应抗体存在。13.质量控制与注意事项①红细胞洗涤不充分,微量残留的未结合的球蛋白将中和抗人球蛋白试剂,影响试验结果的准确性。②直接抗人球蛋白试验的试
7、管在初读结果之后,应再放在室温中5~10分钟,这样孵育后,对C3d或IgA致敏红细胞有增强作用,重新离心后观察结果可使初判的阴性结果转变为阳性结果;而IgG致敏的红细胞在孵育后反应可能会更弱。③试剂中含有0.1%W/V叠氮钠,若摄入人体会引起中毒。④直接抗人球蛋白试剂(抗IgG,C3d)为体外诊断试剂。⑤抗IgG可用于抗体筛选和相容性试验中,但其有一定的局限性,使用抗IgG测定抗体偶尔会失败,可依靠含有抗C3成分的多价抗球蛋白试剂测定,没有被I
此文档下载收益归作者所有