医学细胞生物学实验

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1、医学细胞生物学实验教师：李学英、杨明理联系方式：8609692实验课要求预习穿白大衣并扣好认真操作爱护仪器保持卫生保持安静实验完成后：1、将动物尸体扔到门口动物垃圾桶中；集中送到动物中心焚烧；2、清洗并检查自己桌面上的器材（弯盘、镊子等）；3、做好显微镜使用登记，盖好防尘罩；4、将用过的载玻片刷洗干净后放入回收盆中;5、盖玻片、吸水纸等扔到垃圾桶中。本学期实验进度安排细胞内酸性蛋白和碱性蛋白的原位显示细胞内DNA和RNA的原位显示线粒体的观察细胞膜的通透性观察小白鼠腹腔巨噬细胞吞噬活动的观察细胞内过氧化物酶的原位显示细胞有丝分裂的

2、观察设计型实验报告指导动物细胞融合细胞核的分离与鉴定小白鼠骨髓细胞染色体标本的制备第一次(验证型)第二次(验证型)第三次(验证型)第四次(设计型)第五次（设计型）第六次(验证型)P28P28P23P42P46P28P56P34P38P78第一次实验Ⅰ细胞内酸性蛋白和碱性蛋白的原位显示Ⅱ细胞内DNA和RNA的原位显示Ⅲ线粒体的观察显示细胞内化学组分和细胞器应选用什么技术细胞化学法(cytochemicalmethods)在保持细胞结构的基础上，利用某些化学物质与细胞内某种成分发生化学反应，在局部范围形成有色沉淀的原理，对细胞的化学成

3、分进行定性、定位和定量的研究。细胞结构化学反应有色沉淀定性、定位和定量Ⅰ细胞内酸性蛋白和碱性蛋白的原位显示[实验目的]1、掌握酸、碱性蛋白在细胞内的分布情况；2、了解酸、碱性蛋白显色反应的一般原理和方法。[实验原理]由于不同蛋白质分子所带酸性基团和碱性基团数量不同，生理条件下，整个蛋白质带负电荷多则为酸性蛋白，带正电荷多则为碱性蛋白。可用不同pH值的固绿染色，即可显示细胞内酸性蛋白或碱性蛋白。三氯醋酸可抽提掉核酸，避免影响实验结果[操作流程]制血涂片晾干5min95%乙醇固定晾干90℃三氯醋酸20min抽提流水冲洗晾干染色冲洗、晾

4、干镜检蟾蜍双毁髓法处死20min0.1%碱性固绿心脏血5min0.1%酸性固绿染色冲洗、晾干镜检[注意事项]1、处死蟾蜍的过程要注意安全；2、血涂片制作不宜过厚，切勿反复推片；3、三氯醋酸要冲洗彻底。Ⅱ细胞内DNA和RNA的原位显示1、掌握DNA和RNA在细胞内的分布情况；2、了解DNA和RNA显色反应的一般原理和方法。[实验目的][实验原理]甲基绿和派洛宁是互不混淆、互不影响的两种染色剂，由于其自身分子结构的特点，它们可与两种聚合程度不同的核酸竞争性结合，从而同时显示细胞内DNA和RNA的分布部位。[操作流程]制血涂片晾干10m

5、in95%乙醇固定晾干甲基绿-派洛宁液15min染色冲洗、晾干镜检蟾蜍双毁髓法处死心脏血[注意事项]禁止用三氯醋酸处理每人制三张血涂片Ⅲ线粒体的观察线粒体（mitochondrion）活体染色（vitalstainning）显示活细胞内细胞组分、细胞器应采用什么方法？[实验目的]了解线粒体的活体染色方法。活体染色：应用无毒或毒性较小的染色剂显示活细胞内某些天然结构存在的真实性，同时对细胞生命活动影响较小的一种染色方法。无毒或毒性较小天然结构影响较小[实验原理]线粒体上的细胞色素氧化酶系可保持詹纳斯绿B染料始终处于氧化状态而呈绿色，

6、因此詹纳斯绿B可专一性地对线粒体进行活体染色。[实验步骤]口腔粘膜上皮细胞盖片、镜检取清洁载玻片詹纳斯绿B液1-2滴染色20min[注意事项]1、取材部位及力度2、盖片的技巧3、染液干后的处理内容安排一、实验操作：完成三个实验内容两人一组，每人一套器械（弯盘、镊子）8人一只蟾蜍二、示教三、完成作业：1、通过本次实验学到了哪些基本操作技能？2、结合本次实验请阐述细胞化学技术的原理和应用？3、请描述本次实验的镜检结果。本次实验需要学生巩固的概念细胞化学法本次实验需要学生掌握的实验技能1、双毁髓处死蟾蜍法2、血涂片制作方法3、流水冲洗方

7、法4、正确的镜检方法（显微观察技术）[小结]