申文娟生药1121五项目

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1、项目五酶促转化产物L-丝氨酸的分析鉴定任务1酶促转化产物L-丝氨酸的分析鉴定方案的制定任务2纸层析法分析鉴定L-丝氨酸班级：生药1121姓名：申文娟学号：2011423215组别：第五组组员：申文娟俞靖贡静顾海彬杨恪鉴一、简介蛋白质的组成单位-氨基酸氨基酸结构通式氨基酸（Aminoacid）赋予蛋白质特定的分子结构形态，使他的分子具有生化活性。蛋白质是生物体内重要的活性分子，包括催化新陈代谢的酵素和酶。按R基的极性不同来分类中文名称：丝氨酸英文名称：serine;Ser定义：学名：2-氨基-3羟基丙酸。一种脂肪族极性α氨基酸。L-丝氨酸是组成蛋白质的

2、常见20种氨基酸中的一种，是哺乳动物的非必需氨基酸，也是生酮氨基酸。在自然界中也有D-丝氨酸，如丝原蛋白中。在一些抗生素中也有D-丝氨酸。符号：S。丝氨酸是一种非必需氨基酸，它在脂肪和脂肪酸的新陈代谢及肌肉的生长中发挥着作用，因为它有助于免疫血球素和抗体的产生，维持健康的免疫系统也需要丝氨酸。丝氨酸在细胞膜的制造加工、肌肉组织和包围神经细胞的鞘的合成中都发挥着作用。氨基酸、多肽与蛋白质一、目的：学习并掌握纸层析法分离鉴定氨基酸的原理和方法。二、原理纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分配层析法，其中滤纸纤维上吸附的水是固定相，展层用的有机溶剂是流动相。在

3、层析时，将样品点在距滤纸一端约2～3cm的某一处，该点称为原点；然后在密闭容器中层析溶剂沿滤纸的一个方向进行展层，这样混合氨基酸在两相中不断分配。由于分配系数（Kd）不同，结果它们分布在滤纸的不同位置上。物质被分离后在纸层析图谱上的位置，可用比移值（Rf）来表示。所谓Rf，是指在纸层析中，从原点至氨基酸停留点（又称为层析点）中心的距离（X）与原点至溶剂前沿的距离（Y）的比值。如图在一定条件下（如温度、展层剂的组成、层析纸质量等不变），某种物质的Rf值是常数，因此可作为定性依据。由于氨基酸无色，可利用茚三酮反应使氨基酸层析斑点显色，从而作定性分析。本实

4、验利用纸层析法分离氨基酸。三、试剂和器材：1.试剂：1.展层剂和平衡液正丁醇:冰醋酸:水=4:1:5，充分摇匀，用分液漏斗取上层液作展层剂；下层液作平衡液(弃去)。2.样品液用水配成每ml含有丝氨酸、亮氨酸、脯氨酸各4mg/ml的氨基酸溶液，以及上述四种氨基酸的混合液(各4mg/ml)。3.茚三酮按展层剂0.25%的比例将茚三酮加入展层剂中，使其溶解。实验器材1.层析缸2.点样毛细管3.小烧杯4.培养皿5.量筒6.喷雾器7.吹风机（或烘箱）8.层析滤纸9.直尺及铅笔四、实验步骤1.准备滤纸：取宽约16cm、高约16cm的层析滤纸一张。在纸的下端距边缘

5、2cm处用铅笔划一直线A，在直线上做5个记号，记号之间间隔2cm，标出5个点，这就是原点的位置。另在距左边缘1cm处画一条平行于左边缘的直线B，在B线上以A、B两线的交点为原点标明刻度（以厘米为单位）。2.点样：用毛细管将各氨基酸样品点在5个原点上，用量10～20μl，每点在纸上扩散的直径，最大不超过3mm，边点样边用电吹风吹干，越小越好。干后再点一次。3.层析：将平衡好的滤纸，放入层析缸底部接触展层剂液面，展层剂不可浸没样点，展层剂到达滤纸顶部边缘约0.5cm处停止层析（层析时间2h左右）。然后取出层析滤纸，标好前沿，放入烘箱中45℃烘干。4．显色

6、用喷雾器均匀喷上0。1％茚三酮正丁醇溶液，然后置烘箱中烘烤5分钟(100℃)或用热风吹干即可，滤纸上即显出紫红色或黄色的氨基酸斑点。5．计算各种氨基酸的Rf值。五、注意事项在操作过程中，手不要摸滤纸。点样直径不超过3mm。点样的一端朝下,扩展剂的液面需低于点样线1cm。即时取出滤纸,以免出现氨基酸层析跑到滤纸的外面不能检测。吸样后的毛细管要垂直落在层析纸点样处，样点大小要基本一致；样点不要浸在展开剂中；喷显色剂时，使层析纸湿润即可，切勿流淌，并迅速吹干；在层析纸制作、点样、显色、吹干及值测定等操作过程中，手只能拿在最上端，以防被手沾污。六、思考题⑴层

7、析纸上的样品斑点浸在展开剂中是否可以？为什么？⑵悬挂层析纸为什么不能接触层析缸壁？不可以。因展开剂会稀释、溶解样品，或使样品斑点严重扩散。以免瓶壁上带有的展开剂或其他杂质影响展开过程而使值重现性不好。谢谢观看