肺腺癌实验动物造模

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1、肺腺癌实验动物造模1目录1.动物选择；2.简介目前造模方式；3.简介三种造模方法：3.1采用人肺腺癌SPC-A-1细胞株建立裸鼠皮下移植瘤模型；3.2乙基亚硝脲(ENU)腹腔注射BALB/c小鼠；3.3采用Lox-stop-loxK-rasG12D小鼠鼻腔吸入Ad-Cre重组腺病毒。2动物的选择：小鼠的肺癌在组织、形态、分子特点上与人类肺癌比较相近，且小鼠基因与人类基因的同源性在90%以上，基因容易操纵，所以小鼠肺癌模型在肺癌研究中应用广泛。但是人类肿瘤在小鼠体内生长很快，提示小鼠和人类对肿瘤的敏感性有显著差异，并且小鼠肺癌具有散发性和异源性的特点。因此，小鼠肺癌模型对原发性肺癌的研

2、究价值不大，而多用于制备移植性肺癌模型，如在免疫缺陷小鼠体内进行同位或异位移植。31.目前造模方式1.1自发肿瘤模型；1.2化学或病毒诱癌模型；乙基亚硝脲(ENU，40mg/kg)；A/J小鼠或BABL/c小鼠1.3裸鼠移植肿瘤模型；1.4转基因肺癌动物模型；SP-C/myc/IgEGF双转基因小鼠（寿命9个月），细支气管肺泡腺癌；SV40T抗原与p53蛋白和Rb蛋白结合，建立的转基因小鼠UT7.1发展出多灶性细支气管腺癌。1.5基因敲除/转基因结合化学诱癌模型；4方法一：采用人肺腺癌SPC-A-1细胞株建立裸鼠皮下移植瘤模型：1.动物：裸小鼠（BALB/C-nu/nu裸鼠）；4～5

3、周龄，体重(16±2)g，SPF级，雌雄各半。2.方法：皮下注射细胞悬液；剂量：每只2×10^6SPC-A-1细胞数；部位：右前肢腋窝皮下；3.一般数据信息：平均成瘤时间为7d；28d后，瘤体平均长径为(19.20±3.85)mm；平均短径为(14.94±2.78)mm；平均瘤体体积为(2144.10±1237.72)mm3；平均瘤重为(1.37±0.60)g。5注意事项：(1)裸鼠年龄的选择。一般随着裸鼠年龄增大，裸鼠体内正常T细胞会增加，免疫功能相应增强，影响移植成功率，故一般选取4～5周龄的裸鼠为佳；(2)肿瘤细胞自身的生物学特性。SPC-A-1肺腺癌细胞株，因其分化程度低、恶

4、性程度高、生长速度快等特点，故相对于一些手术切除的标本，其建模的成功率较高；(3)细胞状态的选择。一般选取处于对数生长期的细胞，细胞活力强；(4)接种部位的选择。一般在腋窝部皮下成功率较高，因为此部位血管丰富易使肿瘤成活，且方便肿瘤测量及观察；(5)穿刺进针的角度及深度。进针深度以1.5cm为宜，进针过深肿瘤较难观察且易与深部肌肉组织粘连，过浅易致悬液漏出，导致肿瘤生长大小不均。6方法二：化学诱癌模型1.实验动物：SPF级近交系BALB/c小鼠，鼠龄为4～5周。2.方法：妊娠的第17天；乙基亚硝脲(ENU)腹腔注射；剂量为40mg/kg体重；3.标本采集：子代鼠的鼠龄满32周时收获其

5、全肺标本。4.一般结果：病理显示这些肿瘤为处于不同发展阶段的腺瘤和腺癌，腺癌的类型有细支气管肺泡癌样腺癌(雌性:5/6，雄性:4/6)和分化不等的腺癌(雌性:4/6，雄性:5/6)，诱癌频率在雌、雄性小鼠均为5/6，癌变频率在雌性16/43，雄性12/31。7方法二造模特点(1)一次性给药，避开了多次给药的复杂过程；(2)动物耐受好，肺内肿瘤的生长基本不影响小鼠的生长，在长达32周的观察期间死亡小鼠的数量少；(3)所诱发的肺肿瘤自然演进，有利于动态观察；(4)由于肿瘤发生、发展的不同步性，在一给定的时间点可观察到处于各个发展阶段的肿瘤，有利于评估诱癌频率和肺肿瘤的癌变频率。(5)BA

6、LB/c是一个中等易感的品系，与上述几种品系的小鼠相比，B6、A/J和129等，随着鼠龄的增长可有自发的肺腺瘤或腺癌形成，在A/J小鼠肺肿瘤的发生频率可达100%。8方法三：病毒诱癌模型采用Lox-stop-loxK-rasG12D小鼠鼻腔吸入Ad-Cre重组腺病毒步骤：1.戊巴比妥钠45mg/kg腹腔注射麻醉3周龄小鼠；2.以Ad-CreCaPi的共沉淀物滴入小鼠的鼻腔。制备方法：滴度2.5*10^7pfu的Ad-Cre50μl+69μl的MEM（培养基）+6μl的2.5mol/L的氯化钙3.分2次滴入125μl，隔5d后重复滴入，重复2次。诱导共30d。9方法三一般结果：Lox-

7、stop-loxK-rasG12D小鼠在鼻腔吸入Ad-Cre：(1)7d后，细支气管出现肺支气管上皮增生；(2)20d后，细支气管出现肺支气管上皮非典型性增生；(3)30d后，不仅出现肺支气管非典型性上皮增生,而且旁边出现癌巢。1011ThankYou!