液相色谱培训二：理论基础

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1、液相色谱培训二、理论基础1、基本概念2、基本参数1、基本概念1.1、色谱图(chromatogram)--样品流经色谱柱和检测器，所得到的信号-时间曲线，又称色谱流出曲线(elutionprofile)。1.2、基线(baseline)--经流动相冲洗，柱与流动相达到平衡后，检测器测出一段时间的流出曲线。一般应平行于时间轴。1.3、噪音(noise)--基线信号的波动。通常因电源接触不良或瞬时过载、检测器不稳定、流动相含有气泡或色谱柱被污染所致。1、基本概念1.4、漂移(drift)--基线随时间的缓缓变化。主要由于操作条件如电压、温度、流动相及流量的不稳定所引起，柱

2、内的污染物或固定相不断被洗脱下来也会产生漂移。1.5、色谱峰(peak)--组分流经检测器时响应的连续信号产生的曲线上的突起部分。正常色谱峰近似于对称形正态分布曲线。不对称色谱峰有两种：前延峰(leadingpeak)和拖尾峰(tailingpeak)。1、基本概念1.6、拖尾因子(tailingfactor，T)，用以衡量色谱峰的对称性。也称为对称因子(symmetryfactor)或不对称因子(asymmetryfactor)。1.7、峰宽（peakwidth，W)-峰两侧拐点处所作两条切线与基线的两个交点间的距离。1.8、峰高(peakheight，h)-峰的最

3、高点至峰底的距离。1.9、峰面积(peakarea，A)-峰与峰底所包围的面积。1、基本概念1.10、半峰宽（peakwidthathalf-height，Wh/2)-峰高一半处的峰宽。Wh/2＝2.355σ1.11、标准偏差（standarddeviation，σ)-正态分布曲线x＝±1时（拐点）的峰宽之半。正常峰的拐点在峰高的0.607倍处。标准偏差的大小说明组分在流出色谱柱过程中的分散程度。σ小，分散程度小、极点浓度高、峰形瘦、柱效高；反之，σ大，峰形胖、柱效低。2、基本参数2.1、定性参数（保留值）2.1.1、死时间(deadtime，t0)--不保留组分的保

4、留时间。即流动相（溶剂）通过色谱柱的时间。2.1.2、死体积(deadvolume，V0)--由进样器进样口到检测器流动池未被固定相所占据的空间。2、基本参数2.1.3、保留时间(retentiontime，tR)--从进样开始到某个组分在柱后出现浓度极大值的时间。2.1.4、保留体积(retentionvolume，VR)--从进样开始到某组分在柱后出现浓度极大值时流出溶剂的体积。又称洗脱体积。VR＝F×tR2、基本参数2.2、柱效参数2.2.1、理论塔板数(theoreticalplatenumber，N)--用于定量表示色谱柱的分离效率（简称柱效）。N取决于固定

5、相的种类、性质（粒度、粒径分布等）、填充状况、柱长、流动相的种类和流速及测定柱效所用物质的性质。2、基本参数N与柱长成正比，柱越长，N越大。用N表示柱效时应注明柱长，如果未注明，则表示柱长为1米时的理论塔板数。（一般HPLC柱的N在1000以上。）2.2.2、理论塔板高度(theoreticalplateheight，H)--每单位柱长的方差。实际应用时往往用柱长L和理论塔板数计算。2、基本参数2.3、相平衡参数2.3.1、分配系数(distributioncoefficientK)—在一定温度下，化合物在两相间达到分配平衡时，在固定相与流动相中的浓度之比。随着浓度的

6、增大，K减小，这时色谱峰为拖尾峰；而有时随着溶质浓度增大，K也增大，这时色谱峰为前延峰。在同一色谱条件下，样品中K值大的组分在2、基本参数固定相中滞留时间长，后流出色谱柱；K值小的组分则滞留时间短，先流出色谱柱。混合物中各组分的分配系数相差越大，越容易分离。在HPLC中，固定相确定后，K主要受流动相的性质影响。实践中主要靠调整流动相的组成配比及pH值，以获得组分间的分配系数差异及适宜的保留时间，达到分离的目的2、基本参数2.3.2、容量因子(capacityfactor，k)--化合物在两相间达到分配平衡时，在固定相与流动相中的量之比。因此容量因子也称质量分配系数。容

7、量因子的物理意义：表示一个组分在固定相中停留的时间（t'R）是不保留组分保留时间（t0）的几倍。k＝0时，化合物全部存在于流动相中，在固定相中不保留，t'R＝0；k2、基本参数越大，说明固定相对此组分的容量越大，出柱慢，保留时间越长。容量因子与分配系数的不同点是：K取决于组分、流动相、固定相的性质及温度，而与体积Vs、Vm无关；k除了与性质及温度有关外，还与Vs、Vm有关。由于t'R、t0较VsVm易于测定，所以容量因子比分配系数应用更广泛。2、基本参数2.3.3、选择性因子(selectivityfactor，α)--相邻两组分的分配系数或容量因子