注射用重组人干扰素a2b假单胞菌20104498杨娜

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1、注射用重组人干扰素a2b（假单胞菌）www.themegallery.com注射用重组人干扰素α2b（假单胞菌）ZhusheyongChongzuRenGanraosuα2b(Jiadanbaojun)RecombinantHumanInterferonα2bforInjection（P.putida）目录来源和基本要求制造及检定保存、运输及有效期4123功效来源及要求由高效表达人干扰素α2b基因的腐生型假单胞菌，经发酵、分离和高度纯化后冻干制成。含适宜稳定剂，不含防腐剂和抗生素。生产和检定用设施、原料及辅料水、器

2、具、动物等应符合“凡例”的有关要求。功效抗病毒、抗肿瘤、抑制细胞增殖以及提高免疫功能等作用。提高免疫功能包括增强巨噬细胞的吞噬功能增强淋巴细胞对靶细胞的细胞毒性和天然杀伤性细胞的功能。原理干扰素与细胞表面受体结合，诱导细胞产生多种抗病毒蛋白，抑制病毒在细胞内繁殖干扰素对肿瘤细胞具有直接抑制作用,能够调节宿主抗肿瘤免疫反应并通过抑制、分解肿瘤细胞生长所需因子等作用改变宿主与肿瘤细胞的关系制造（2010版药典）2．1工程菌菌种2．1．1名称及来源重组人干扰素α2b工程菌株系由带有人干扰素α2b基因的重组质粒转化的腐生型

3、假单胞菌菌株(PseudomonasputidaVG-4)。2．1．2种子批的建立应符合“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”的规定。2．1．3菌种检定主种子批和工作种子批的菌种应进行以下各项全面检定。2．1．3．1划种LB琼脂平板应呈典型腐生型假单胞菌集落形态，无其他杂菌生长。2．1．3．2染色镜检棒状，可运动，有荚膜，无芽孢。涂片染色后应呈典型的革兰阴性。2．1．3．3对抗生素的抗性应与原始菌种相符：硫酸链霉素150μg/ml，盐酸四环素50μg/ml和氨苄西林100μg/ml。2．1．3．4电镜检查（工作种子批

4、可免做）应为典型腐生型假单胞菌形态，无支原体、病毒样颗粒及其他微生物污染。2．1．3．5生化反应不液化明胶，不水解淀粉和聚β-羟基丁酸酯（附录ⅪⅤ），不能利用反硝化作用进行厌氧呼吸，能够合成荧光色素。2．1．3．6干扰素表达量在摇床中培养，应不低于原始菌种的表达量（1.0×109IU/L）。2．1．3．7表达的干扰素型别应用抗α2b型干扰素参考血清做中和试验，证明型别无误。2．1．3．8质粒检查该质粒的酶切图谱应与原始重组质粒相符。2.1.3.9目的基因核苷酸序列检查目的基因核苷酸序列应与理论值相符。制造2．2原液

5、2．2．1种子液制备将检定合格的工作种子批菌种接种于适宜的培养基（可含适量抗生素）中培养，供发酵罐接种用。2．2．2发酵用培养基采用适宜的不含任何抗生素的培养基。2．2．3种子液接种及发酵培养2．2．3．1在灭菌培养基中接种适量种子液。2．2．3．2在适宜的温度下进行发酵，应根据批准的发酵工艺进行，并确定相应的发酵条件，如温度、pH值、溶氧、补料、发酵时间等。发酵液应定期进行质粒丢失率检查（附录ⅨG）。2．2．4发酵液处理用高速离心法收集处理菌体。收集到的菌体可在-20℃以下保存1年。2．2．5初步纯化采用经批准的

6、纯化工艺进行初步纯化，使其纯度达到规定的要求。2．2．6高度纯化经初步纯化后，采用经批准的工艺进行高度纯化，使其达到3.1项要求，即为干扰素原液。除菌过滤后保存于适宜温度，并规定其有效期。2．2．7原液检定按3.1项进行。制造半成品配制与除菌稀释液配制按经批准的配方配制稀释液。配制后应立即用于稀释。稀释与除菌将检定合格加稳定剂白蛋白的干扰素原液用项稀释液稀释至所需浓度。除菌过滤后即为半成品，保存于2～8℃。半成品检定原液检定生物学活性蛋白质含量比活性制造2.4成品2.4.1分批应符合“生物制品分批规程”规定。2.4

7、.2分装及冻干应符合“生物制品分装和冻干规程”规定。2.4.3规格应为经批准的规格。2.4.4包装应符合“生物制品包装规程”规定纯度电泳法依法测定（附录ⅣC）。用非还原型SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法，分离胶胶浓度为15%，加样量应不低于10μg(考马斯亮蓝R250染色法)或5μg(银染法)。经扫描仪扫描，纯度应不低于95.0%。高效液相色谱法依法测定（附录ⅢB）。色谱柱以适合分离分子质量为5～60kD蛋白质的色谱用凝胶为填充剂；流动相为0.1mol/L磷酸盐-0.1mol/L氯化钠缓冲液，pH7.0；上样量不低于2

8、0μg，于波长280nm处检测，以干扰素色谱峰计算理论板数应不低于1000。按面积归一化法计算，干扰素主峰面积应不低于总面积的95.0%。分子量检定依法测定（附录ⅣC）。用还原型SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法，分离胶胶浓度为15%，加样量应不低于1.0μg，制品的分子质量应为19.2kD±1.92kD。其他检测外源性DNA残留量残余抗生素活性细菌内毒素检查紫外