植物病原细菌学实验

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1、植物病原细菌学实验实验一　植物病原细菌常用培养基的制作与灭菌1.了解细菌培养基的种类；2.掌握常用细菌培养基的配方和制作方法；3.掌握培养基的灭菌方法。一、实验目的二、实验内容和操作方法（1）配方：牛肉膏3ｇ，蛋白胨10ｇ，NaCl5ｇ，琼脂20ｇ，蒸馏水1000ｍL。1.牛肉膏蛋白胨培养基(NA)：分离和培养最常用（2）配制过程：将牛肉膏、蛋白胨、NaCl溶于蒸馏水后，调节pH7.2，加入琼脂溶化后分装于三角瓶和试管。（一）培养基的配制2.Hugh和Leifson（HL）培养基：细菌的好氧性和厌氧性测定蛋白胨2.0g氯化钠5.

2、0g磷酸氢二钾0.2g琼脂3.0g蒸馏水1000.0mlpH7.4~7.8溴百里酚兰（1.6％酒精溶液1.5ml）待培养基融化，并调pH后，装于试管中，每支试管装9ml灭菌。培养基凝固后，用接种针蘸细菌悬浮液针刺接种，一直刺到管底。分别在培养2、4和7d后观察记录。好氧性细菌，只在开管的上部生长；兼性厌氧性细菌，则在开管的上下部都能生长；厌氧性细菌，则只能在开管的下部和闭管中生长。（1）配方：NH4H2PO41.0ｇ，氯化钾0.2ｇ，MgSO4.7H2O0.2ｇ，蒸馏水1000ｍL，溴百里酚兰（1.6%酒精溶液）1.5mL;1%碳

3、素化合物。3.Ayers培养基：碳素化合物产酸试验单糖（葡萄糖、半乳糖）；双糖（麦芽糖、乳糖）；多糖（淀粉）；醇（甘露醇）。有的细菌不产酸和气，有的只产酸不产气，少数植物病原细菌既产酸又产气（3）分装：将上述培养基分装于试管中，每管10mL左右。如果测定气体产生，加上杜氏发酵小玻管后灭菌。产酸时培养液变黄，产碱时变蓝，产气则小玻管内培养液被部分排出，出现空隙。（2）配制过程：将NH4H2PO4、氯化钾、MgSO4.7H2O溶于蒸馏水，调节pH7.0后加入溴百里酚兰，最后加入碳素化合物（也可分别灭菌后加入）4.MR和VP试验：对葡萄

4、糖的分解能力（1）配方：蛋白胨5ｇ，葡萄糖5ｇ，磷酸氢二钾5ｇ，蒸馏水1000ｍL。（2）配制过程：将蛋白胨、葡萄糖、磷酸氢二钾溶于蒸馏水，调节pH7.0-7.2，每管分装5mL即可。5.硝酸盐还原（1）配方：硝酸钾1.0ｇ，蛋白胨5.0ｇ，酵母膏3.0ｇ，蒸馏水1000ｍL，pH7.0-7.2（2）配制过程：将硝酸钾、蛋白胨、酵母膏称好后，溶解于蒸馏水后，调节pH。6.半胱氨酸培养液：测定产H2S能力（1）配方：蛋白胨10ｇ，硫酸钠0.1g，半胱氨酸0.1g，蒸馏水1000ｍL。（2）配制过程：将半胱氨酸、蛋白胨、硫酸钠称好后，

5、溶解于水中，调节pH7.0-7.3即可。7.吲哚试验（1）配方：蛋白胨20.0ｇ，磷酸氢二钠2.0g，葡萄糖10.0g，蒸馏水1000ｍL。（2）配制过程：将蛋白胨等称好后，溶解于蒸馏水，调节pH7.0-7.2即可。8.明胶液化（1）配方：牛肉浸膏3.0g，蛋白胨5.0ｇ，明胶10-12%，蒸馏水1000ｍL。（2）配制过程：将牛肉浸膏、蛋白胨溶解于蒸馏水中，调节pH7.0-7.2后，将明胶溶解于此溶液中，即可分装于试管中。9.淀粉水解试验（1）配方：牛肉浸膏3.0g，蛋白胨17.5ｇ，淀粉1.5g，琼脂15-20g，蒸馏水100

6、0ｍL。（2）配制过程：将牛肉浸膏、蛋白胨、淀粉称好后，溶解于蒸馏水中，加入称好的琼脂，待融化后调节pH7.0-7.2。10.石蕊牛乳反应（1）配方：脱脂牛乳1000ｍL，石蕊液（4%）15-20mL。（2）配制过程：提前配制石蕊液（二）培养基的灭菌上述培养基应按培养基配方中规定的条件及时进行灭菌。普通培养基为121℃20~30min，以保证灭菌效果和不损伤培养基的有效成份。培养基经灭菌后，如需要作斜面固体培养基，则灭菌后立即摆放成斜面，斜面长度一般以不超过试管长度的1/2为宜；半固体培养基灭菌后，垂直冷凝成半固体深层琼脂。明胶培

7、养基灭菌12-15分钟。石蕊牛乳培养基间歇灭菌3次，每次通蒸汽20-30分钟。灭菌方法灭菌是指杀死或消灭一定环境中的所有微生物，灭菌的方法分物理和化学灭菌法两大类。本实验主要介绍物理方法的一种，即加热灭菌。加热灭菌包括湿热和干热灭菌两种。通过加热使菌体内蛋白质凝固变性，从而达到杀菌目的。高压蒸汽灭菌法高压蒸汽灭菌用途广，效率高，是基于水的沸点随着蒸汽压力的升高而升高的原理设计的。当蒸汽压力达到1.05kg/cm2时，水蒸气的温度升高到121℃，经20～30min，可全部杀死锅内物品上的各种微生物和它们的孢子或芽孢。一般培养基、玻

8、璃器皿以及传染性标本和工作服等都可应用此法灭菌。操作方法和注意事项如下:加水打开灭菌锅盖，向锅内加水到水位线。注意水要加够，防止灭菌过程中干锅。装料、加盖灭菌材料放好后，关闭灭菌器盖，采用对角式均匀拧紧锅盖上的螺旋，使蒸汽锅密闭，勿使漏气。排气打开