植物染色体的孚尔根染色法

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1、实验四植物染色体的孚尔根染色法一、实验原理孚尔根（Feulgen）染色法是鉴别细胞核中DNA的组织化学方法,其原理与希夫试剂的化学性质有关。希夫试剂是由碱性品红与亚硫酸氢钠和盐酸作用而生成的,为无色透明的溶液,它遇醛类物质即呈紫红色,故可用于鉴定醛基的存在。DNA分子结构中本身无醛基,但在60ºC1M盐酸的水解作用下,部分地打断DNA分子中脱氧核糖与嘌呤间的糖苷键,使嘌呤碱基脱落,并在脱氧核糖的第一个碳原子上释放出活性醛基,该基团遇希夫试剂即呈紫红色。在细胞内只有DNA才具有这种反应,故可定性地鉴定细

2、胞核内DNA的存在。这一染色方法是Feulgen和Rossenbeck于1924年首先发现和确定的,故称孚尔根染色法。二、实验目的在熟悉火焰干燥法制片的基础上,掌握弗尔根染色法,并观察有丝分裂的各个时期三、材料、方法、器具、药品小麦根尖希夫试剂，45%醋酸，Carnoy’s固定液碱性品红、偏重亚硫酸钠、活性炭、1M盐酸镊子载玻片盖玻片显微镜青霉素瓶子恒温水浴锅四、实验步骤希夫试剂的配制将0.5g碱性品红徐徐加入煮沸的100ml蒸馏水中,用玻璃棒搅拌,使之充分溶解,待溶液冷却至58C左右,过滤于棕色瓶

3、中。当滤液冷却至26C时,再加入10ml的1M盐酸和0.5g亚硫酸氢钠或偏重亚硫酸钠(钾),摇动,溶解后密封于棕色瓶中,置于黑暗低温处。次日检查溶液颜色,须呈无色透明或淡茶色才可使用。若稍呈红色可加入0.5g活性炭连续摇动,在4C下静置过夜,然后过滤脱色。染色过程取固定好的根尖,用水洗2-3分钟,放入室温条件下的1NHCl处理根尖材料2-3分钟。将根尖换入60℃预热的HCl,置于恒温水浴中,在600.5℃的条件下水解8-10分钟。吸出热HCl,换入室温1NHCl再处理1-2分钟,然后水洗2-3次

4、。吸净水分,加入Schiff试剂,盖上盖子,在黑暗条件下染色30分钟,也可过夜。用水漂洗,去掉细胞中残存的一些有色的品红分子。取根尖置载玻片上,用镊子夹碎后,加一滴45醋酸,然后盖上盖片。压片、观察。玉米染色体核型图(2n=20),Feulgen染色玉米染色体核型图(2n=20+2B)玉米染色体核型图(2n=20+4B)http://www.agron.missouri.edu/mnl/79/18rosado.htmRye,Secalecereale,2n=2x=14+2B(standardB),m

5、etaphaseIpairingwith5IIring+2IIrod+1Brod,FEULGENstaininghttp://www.desicca.de/Rye%20gene%20map/Other_genes/B_chromosome/b_chromosome.htmlhttp://equitationpassion.free.fr/determinisme_genetique_des_robes_des_chevaux_fichiers.htm四、结果与分析