《赵有龙开题报告》PPT课件

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1、学位论文开题报告东亚蝎毒素AGAP中枢镇痛机制的研究报告人：赵有龙指导老师：张双全教授曹鹏博士目录前言选题依据及意义国内外研究进展研究目标和内容技术路线进度安排预期结果及创新之处前言东亚钳蝎(ButhusmartensiKarsch，简称BmK)广泛分布于我国的辽宁、山东、河南等省和东亚地区。中医临床所用的全蝎主要是指东亚钳蝎，起主要生物活性功能的便是全蝎尾部所产的毒液。蝎毒素蝎毒中含有多种生物活性成分，主要有由蛋白质（蝎毒素）和非蛋白质两组分组成。根据其肽链的长短可分为蝎长肽毒素和蝎短肽毒素蝎毒素按其作用受体的不同可分为：钠离子通道蝎毒素蝎长肽

2、毒素（60～76个aa）钾离子通道蝎毒素钙离子通道蝎毒素氯离子通道蝎毒素蝎短肽毒素（28～40个aa）东亚钳蝎镇痛抗肿瘤缬精甘肽(analgesicantitumoralpeptide，AGAP)是刘岩峰在2003年从东亚钳蝎蝎毒中分离纯化得到的单组分活性肽。AGAP成熟肽含有66个aa，因此属于蝎长肽毒素。选题依据及意义选题依据：2003年刘岩峰等运用小鼠醋酸扭体模型和热板法实验研究表明,AGAP活性肽具有较强的镇痛活性。本实验室于杰淼师兄通过小鼠醋酸扭体实验证明原核重组表达的AGAP具有明显的镇痛作用。而且，与相同质量的吗啡相比，重组AGAP

3、具有更好的镇痛效果。重组AGAP对小鼠的镇痛作用的扭体实验正常扭体扭体扭体1996年李宁等研究证明蝎毒素有很强的中枢镇痛作用,且镇痛作用强于吗啡4倍以上。大量实验表明：与其他镇痛药相比，蝎毒素具有较好的修复受损神经的功效，无其他副作用等优特点。蝎毒素AGAP成熟肽同源性比较AGAP与其他九种蝎毒素同源性非常高，其中与Bukatoxin的同源性最高，达到86.36%。经文献考证，这九种蝎毒素基本上均为钠离子通道蝎毒素，由此推论AGAP可能是一种钠离子通道蝎毒素，影响细胞膜上的钠离子电流。钠离子通道简介：钠离子通道由4个α亚基和2个β亚基组成。钠离子

4、通道亚型分类钠离子通道根据α亚基的不同分为十种，其中跟镇痛相关的主要有Nav1.3、Nav1.7、Nav1.8、和Nav1.9。鼠的α亚基系统发生树背根节神经元是疼痛感觉传入的第一级神经元下丘脑大脑皮层1997年张瑞德等研究了辽宁产东亚钳蝎毒的某些活性物质对海马CA1区痛放电的抑制作用，其作用途径：一方面通过激活内源性阿片系统，另一方面还有其它途径；乙酰胆碱、五羟色胺与增强蝎毒的镇痛作用有密切的关系，蝎毒可增加乙酰胆碱的释放，从而协同蝎毒的镇痛作用选题意义：由于AGAP与其他镇痛药相比具有更好的应用价值，本文通过研究其镇痛作用的机制，进而为AGA

5、P作为镇痛药物应用于临床实验提供科学依据。国内外研究进展国内研究进展中医临床所用的全蝎主要是指东亚钳蝎，在我国中医史上已有2000多年应用历史。自宋代以来，东亚钳蝎全虫便被视为一种名贵中药，用于镇痉息风、治疗风湿麻痹痛等。根据《本草纲目》记载，蝎子具有攻毒散结、通络止痛的作用。中国科学院上海生理所自70年代末开始了东亚钳蝎神经毒素的生化与镇痛药理学研究。我国自20世纪80年代以来对蝎毒镇痛作用开展了广泛动物实验研究。2003年刘岩峰等通过小鼠扭体和热板实验初步研究表明AGAP具有镇痛效应。国外进展：目前，国外对蝎毒新成分的纯化、活性、机理研究相当

6、活跃，其中，蝎毒功能的研究中离子通道是一个焦点。研究目标和内容研究目标：应用多种分子生物学技术从神经中枢系统方面研究AGAP作用的受体及其下游的信号通路，确定AGAP中枢镇痛的分子机制。研究内容：1、在体外分离单个背根神经细胞，借助Na+荧光染料SBFI和钠离子通道阻断剂TTX证明AGAP镇痛作用的受体是钠离子通道2、在体内，脊髓鞘内注射反义核苷酸研究AGAP作用受体亚型的类别。从mRNA和蛋白质水平分析AGAP的作用是否与受体亚型的表达量有关。制作背根神经组织冰冻切片确定AGAP的镇痛作用是否与受体亚型的重新分布有关。3、应用纳络酮特异性抑制阿

7、片受体信号通路，检验AGAP镇痛机制与阿片受体类型的关系。4、小鼠侧脑室给药后分离脑组织测定5-羟色胺(5-HT)的含量说明AGAP是否通过提高中枢5-HT的含量发挥作用。5、mRNA水平上测定胞内痛指标c–fos的表达量，用于说明AGAP镇痛是否与调节c-fos基因的表达量有关。其镇痛作用是否与其受体亚型的表达量有关激光共聚焦技术确定其受体为细胞膜上的钠离子通道确定作用于钠离子通道受体亚型的类别利用反义核苷酸实时定量PCR免疫组化激光共聚焦技术是否与钠离子通道亚型在细胞上的重新分布有关细胞膜上受体的研究AGAP胞内信号通路的研究（研究路线）技术

8、路线背根神经AGAP镇痛机制是否与阿片受体信号通路有关AGAP镇痛机制是否与中枢5-羟色胺的含量有关AGAP镇痛是否与调节c-fos基因