《纯培养和显微技术》PPT课件

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1、第2章纯培养和显微技术南京工业大学生物与制药工程学院蔡恒微生物的基本特点：小！在绝大多数情况下都是利用微生物的群体来研究其属性；微生物的物种（菌株）一般也是以群体的形式进行繁衍、保存；培养技术在微生物学中具有重要意义！参见P13在研究中所使用的微生物培养群体：培养物：在一定的条件下培养、繁殖得到的微生物群体混合培养物：含有多种微生物的培养物；纯培养物：只有一种微生物的培养物；通常情况下只有纯培养物才能提供可以重复的结果纯培养技术是进行微生物学研究的基础！参见P13微生物个体微小的特点也决定了显微技术是进行微生物研究的另一项重要技术，因为绝大多数微生物的个体形态及其内部结构只能

2、通过显微镜才能进行观察和研究。（P12第一段）微生物的基本特点：小！参见P13第一节微生物的分离和纯培养无菌概念、纯培养概念、纯培养物的获得方法第二节显微镜和显微技术各种显微镜的基本原理及其样品制备方法第一节微生物的分离和纯培养从混杂的群体中分离特定的某一种微生物，是研究和利用微生物的第一步。一、无菌技术用于分离、培养微生物的器具事先不含任何微生物；在转接、培养微生物时防止其它微生物的污染，其自身也不污染环境；（P14第1段）（参见P13、14）一、无菌技术参见P14一、无菌技术参见P141、微生物培养的常用器具及其灭菌常用的器具：试管、瓶子、培养皿等1887年，RJPetr

3、i发明Petridish参见P14装有培养基后称为“培养平板”Or“平板”(plate)(具体灭菌方法第6章介绍)高温干热灭菌高压蒸汽灭菌试管、瓶子、培养皿等常用的灭菌方法：1、微生物培养的常用器具及其灭菌常用的器具：参见P142、接种操作无菌操作：火焰附近（酒精灯、煤气灯）进行参见P15二、用固体培养基分离纯培养培养基：液体培养基；固体培养基；半固体培养基；参见P15二、用固体培养基分离纯培养培养基：液体培养基；固体培养基；半固体培养基；固化剂柯赫（RobertKoch）的助手WHeese和他的夫人FranHeese参见P15琼脂二、用固体培养基分离纯培养菌落（colony

4、）：单个（或聚集在一起的一团）微生物在适宜的固体培养基表面或内部生长、繁殖到一定程度可以形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞生长群体。（P15，倒数第2段）众多菌落连成一片菌苔（lawn）不同微生物在特定培养基上生长形成的菌落或菌苔一般都具有稳定的特征（形状、颜色等），可以成为对该微生物进行分类、鉴定的重要依据（见P15，倒数第二段；图2-3）。斜面培养基上细菌菌苔特征液体培养基中细菌生长特征二、用固体培养基分离纯培养使微生物在固体培养基平板上形成单个菌落的基本方法：稀释！参见P16二、用固体培养基分离纯培养1、稀释倒平板法2、涂布平板法操作较麻烦，对好氧菌、热敏感菌效果不

5、好！使用较多的常规方法，但有时涂布不均匀！参见P16二、用固体培养基分离纯培养3、平板划线法参见P16二、用固体培养基分离纯培养3、平板划线法参见P163、平板划线法参见P16二、用固体培养基分离纯培养4、厌氧微生物的分离厌氧罐厌氧手套箱参见P17二、用固体培养基分离纯培养4、厌氧微生物的分离厌氧罐厌氧手套箱参见P17二、用固体培养基分离纯培养4、厌氧微生物的分离稀释摇管法参见P16三、用液体培养基分离纯培养稀释法进行液体分离必须在同一个稀释度的许多平行试管中，大多数（一般应超过95%）表现为不生长。在有细菌生长的试管中得到纯培养的几率为97.5%参见P17四、单细胞（孢子）

6、分离一般采用显微操作仪，在显微镜下进行；操作难度与细胞或个体的大小成反比；参见P17～18通过机械、空气或油压传动装置来减小手的动作幅度，在显微镜下用毛细管或显微针、钩、环等挑取单个微生物细胞或孢子以获得纯培养。利用刚才介绍的技术，我们是否有可能获得某一个生态环境（例如1克土壤）中所有种类细菌的纯培养？假设待分离的细菌均能利用某一相同的培养基生长同一生态环境中混杂存在着不同种类的细菌；不同细菌在数量存在差异；微生物在自然条件下存在的特点：五、选择培养分离抑制大多数其它微生物的生长；使待分离的微生物生长更快；使待分离的微生物在群落中的数量上升，方便用稀释法对其进行纯化。微生物群

7、落中数量占少数的微生物的分离纯化：没有一种培养基或一种培养条件能够满足自然界中一切微生物生长的要求，在一定程度上所有的培养基都是选择性的。（P18第2大段）使待分离的微生物生长“突出”；直接挑取待分离的微生物的菌落获得纯培养。参见P18五、选择培养分离1.利用选择培养法进行直接分离待分离的微生物生长，其它微生物的生长被抑制高温下培养：分离嗜热细菌；培养基中不含N：分离固氮菌；培养基加抗生素：分离抗性菌；参见P18五、选择培养分离1.利用选择平板进行直接分离待分离的微生物的生长特征明显不同于其它微生物牛奶