《种子扩大培养》PPT课件

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1、1第三章种子扩大培养21、种子扩大培养：将保存在砂土管，冷冻干燥管中处于休眠状态的生产菌种接入试管斜面活化后，再经扁瓶或摇瓶及种子罐逐级扩大培养而获得一定数量和质量的纯种的过程。这些纯种培养物称为种子。2．种子培养任务：保持生产菌种的优良生产性能，得到比较纯净的种子，菌健壮，还要有足够的量，以供大规模生产用。种子培养质量的好坏，关系到发酵产物的产量、质量。3．生产菌种的基本要求一个发酵产物可有多种产生菌，但产生菌不等于生产菌，作为生产菌要有一定条件和要求：3（1）高产稳产性能：合成能力高，遗传性相对稳定（遗传特性包括

2、生产性能，生理特性，形态特性）菌种不衰退、难变异。（2）要求较粗放：较易培养，生长繁殖较快，可利用比较多种的原料，此原料要求经济易得。培养快表现在发酵周期短，生产工艺简便——用一般的生产方法可生产，易提炼，要有一定抗污染的能力，包括抗杂菌，抗噬菌体。（3）非病原菌：对发酵操作如此，且发酵产品用于食品，医药有很大部分，用于此类的菌还要求不产生毒素。（4）最好能耐自身代谢产物，最好可耐高、低温，可耐高温则热天可生产，省下冷却水，最好可耐酸碱。最好产生泡沫少，泡沫多，则需消耗消泡剂多，产品提炼困难。现生产菌种大多为人工长期

3、选育的变异株（或突变体），要完全符合以上四条的很少，且其会衰退变异，因而要不断选育新的菌种。44．生产上的防止菌种的变异和衰退，采取以下措施（1）适宜的保存方法：主要原理是利用低温、干燥、真空；如斜面、砂土、矿物油。（2）限制使用期：斜面1-2月移植；砂土1-2年。（3）减少传代次数，限制菌种的开启次数，为防染菌（4）定期分纯：必用单细胞或单孢子的分离，分离后的单细胞（单孢子）要进行生产能力的测定，要求不低于原有的菌种。5第一节种子的制备过程种子制备的过程大致可分为：实验室种子制备阶段生产车间种子制备阶段6制备过程：

4、实验室：保存菌种→斜面上活化→悬浮液（如为孢子叫孢悬液）→生产车间：一级种子罐→二级种子罐→发酵罐一、实验室种子制备（1）产孢子多的可用米粒用大（小）米或玉米、麦片为原料（原料简单易得，成本低）繁殖孢子的数量较多。要严格控制灭菌的含水量。接种时砂土管或冷冻管→悬浮液→大（小）米粒培养基→成熟（亲米）→大（小）米培养基→培养成熟（生产米）(→进种子罐)（2）产孢子能力不强或发芽慢者→摇瓶→得菌丝体（3）斜面→活化几次→摇瓶7（一）孢子的制备1，细菌孢子的制备细菌的斜面培养基多采用碳源限量而氮源丰富的配方。培养温度一般为

5、37˚C。细菌菌体培养时间一般为1~2天，产芽孢的细菌培养则需要5~10天。82，霉菌孢子的制备霉菌孢子的培养一般以大米、小米、玉米、麸皮、麦粒等天然农产品为培养基。培养的温度一般为25~28˚C。培养时间一般为4~14天。93，放线菌孢子的制备放线菌的孢子培养一般采用琼脂斜面培养基，培养基中含有一些适合产孢子的营养成分，如麸皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些无机盐等。培养温度一般为28˚C。培养时间为5~14天。10（二）液体种子制备1，好氧培养：对于产孢子能力不强或孢子发芽慢的菌种，如产链霉素的灰色链霉菌（S.grise

6、us）、产卡那霉素的卡那链霉菌（S.Kanamuceticus）可以用摇瓶液体培养法。将孢子接入含液体培养基的摇瓶中，于摇瓶机上恒温振荡培养，获得菌丝体，作为种子。试管→三角瓶→摇床→种子罐112，厌氧培养：对于酵母菌（啤酒，葡萄酒，清酒等）试管→三角瓶→卡式罐→种子罐12二、生产车间种子制备实验室制备的孢子或液体种子移种至种子罐扩大培养，种子罐的培养基虽因不同菌种而异，但其原则为采用易被菌利用的成分如葡萄糖、玉米浆、磷酸盐等，如果是需氧菌，同时还需供给足够的无菌空气，并不断搅拌，使菌（丝）体在培养液中均匀分布，获得

7、相同的培养条件。131，种子罐的作用：主要是使孢子发芽，生长繁殖成菌（丝）体，接入发酵罐能迅速生长，达到一定的菌体量，以利于产物的合成。142，种子罐级数的确定种子罐级数：是指制备种子需逐级扩大培养的次数，生产上只有一级发酵不合算，故生产上至少要用二级发酵，但种子罐级数多，则设备多，污染的机会也多，工艺就复杂了，故也不可太多级种子罐（实验室用一级发酵）1．种子罐级数的决定（1）根据生产菌的特性：生产繁殖快慢，产孢子能力大小。孢子发芽率，发芽时间。如生长繁殖快，孢子多，发芽率高，发时时间短，则级数少（2）根据发酵罐的接

8、种量：（3）发酵罐与种子罐的体积比V发酵罐/V种子罐比数越大，种子级数越大。15发酵罐接种量少，则级数少，接种量决定于①根据菌的生长特性（生长快接种量少），看接种菌，如细菌接种量0.1-5%，酵母菌10%，霉菌放线菌7-15%（但霉菌也有少的，如制霉菌素，Nystatir只用1%）②根据种子质量：活力高则接种量少现相当多的产品采用大接种量，如庆