微生物学实验3-11-cm

《微生物学实验3-11-cm》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、实验3实验室环境及人体表面微生物的检查分离目的要求1.证实实验室环境与人体表明存在微生物。2.体会无菌操作的重要性。3.观察不同类群微生物的菌落形态特征。4.无菌操作，将分离的典型菌落划线培养于固体斜面。原理通过培养的方法使肉眼看不见的单个菌体在固体培养基上，经过生长繁殖形成几百万个菌聚集在一起的肉眼可见的菌落。操作步骤1.做好标记2.不同样品采集3.平板倒扣37℃或室温培养abcd请注意无菌操作思考题体会实验报告根据p8表格填写实验报告。实验4显微镜的使用及细菌的简单染色法p436.双眼同时睁开观察，减少眼睛疲劳，且可同时画图和记录。7.可不佩戴眼睛操

2、作，注意不要压破载玻片，不触碰样品处8.双眼聚焦于同一个视野。。。。。。油镜使用待后面演示简单染色法是只用一种染料使细菌着色以显示其形态的方法难于辨别细菌细胞的构造。用于生物染色的染料主要有碱性染料、酸性染料和中性染料三大类。碱性染料的离子带正电荷，能和带负电荷的物质结合。因细菌蛋白质等电点较低，当它生长于中性、碱性或弱酸性的溶液中时常带负电荷，所以通常采用碱性染料(如美蓝、结晶紫、碱性复红或孔雀绿等)使其着色。酸性染料的离子带负电荷，能与带正电荷的物质结合。当细菌分解糖类产酸使培养基pH值下降时，细菌所带正电荷增加，因此易被伊红、酸性复红或刚果红等酸性

3、染料着色。中性染料是前两者的结合物又称复合染料．如伊红美蓝、伊红天青等。三、实验材料奥林巴斯普通光学显微镜（复式显微镜）同学们分离纯化培养的不同菌株草酸铵结晶紫染液，齐氏石炭酸复红染液载玻片、接种环、酒精灯、香柏油、二甲苯、擦镜纸、吸水纸等。（一）、制作细菌观察片（单染色）（1）涂片在洁净无脂的载玻片中央滴一小滴无菌水，用无菌操作方法从菌种斜面挑取少量菌体与水滴充分混匀，用另外一个载玻片向一侧推菌悬液滴一次，涂成薄膜，涂布面积约1～1.5cm2。（2）干燥将涂片于室温中自然干燥。（3）固定手执载片—端，使涂菌的一面向上，将载片通过微火2～3次。在火上固定

4、时，用手摸涂片反面，以不烫手为宜。不能将载片在火上烤，否则细菌形态毁坏。（4）染色将涂片置于水平位置，滴加染色液覆盖于涂菌处，染色约2min。（5）水洗倾去染色液，斜置载片，用自来水的细水流由载片上端流下，不得直接冲在涂菌处，直洗至从载片上流下的水中无染色液的颜色为止。（6）干燥自然晾干或用吸水纸轻轻地吸干，注意不要擦掉菌体。（7）待标本完全干燥后，先用低倍镜和高倍镜观察，将典型部位移至视野中央，再用油镜观察。一二甲苯有毒，同学请注意安全，且会腐蚀镜头，不宜使用过多注意事项1．载玻片要洁净无脂，否则菌液涂不开。涂片时，滴水不要过多（1小黄豆），挑菌量宜适

5、中，菌膜宜薄，切忌过厚（不要来回涂抹）。2．在染色过程中，不可使染液干涸。3.无菌操作，接种环一定要冷却后再取菌。4.涂片干燥后加热固定，加热时间不宜过长（3-6次）问题和思考1．涂片在染色前为什么要先进行固定?固定时应注意什么问题?2．制片为什么要完全干燥后才能用油镜观察？3.使用油镜时，为什么必须用香柏油？4.镜检标本时，为什么先用低倍镜观察，而不是直接用高倍镜或油镜观察？五、实验报告(一)绘图（细菌形态图）P46(二)单染色法操作要点。实验4革兰氏染色法荚膜染色一、实验目的目的：1.巩固显微镜操作技术及无菌操作技术;2.学习革兰氏染色法以及荚膜染

6、色法；3.掌握染色原理。二、原理革兰氏染色法法可将所有的细菌区分为革兰氏阳性菌(G－)和革兰氏阴性菌(G＋)两大类，是细菌学上是常用的鉴别染色法。该染色法所以能将细菌分为G－菌和G＋菌，是由这两类菌的细胞壁结构和成分的不同所决定的。G－菌的细胞壁中含有较多易被乙醇溶解的类脂质，而且肽聚糖层较薄(10nm,2-3层)、交联度低，故用乙醇或丙酮脱色时溶解了类脂质，增加了细胞壁的通透性，使初染的结晶紫和碘的复合物易于渗出，结果细菌就被脱色，再经番红复染后就成红色。G＋菌细胞壁中肽聚糖层厚（20-80nm，15-50层）且交联度高，类脂质含量少，经脱色剂处理后反

7、而使肽聚糖层的孔径缩小，通透性降低，因此细菌仍保留初染时的颜色。金黄色葡萄球菌革兰氏染色图大肠杆菌革兰氏染色图革兰氏染色的实际意义(1)鉴别细菌:用此染色法可将所有细菌分为两大类,这样可将致病菌的范围缩小,然后再进一步鉴定.(2)选择药物:革兰氏阳性菌与革兰氏阴性菌在细胞壁等结构上有很大差别,因而对抗菌素等药物的敏感度不一.例如大多数阳性菌对青霉素敏感，大多数阴性菌对青霉素不敏感(脑膜炎球菌等除外),可供临床实践中选用抗菌药物的参考.(3)与致病性的关系:大多数革兰氏阳性菌的致病物质主要为外毒素;而大多数革兰氏阴性菌的致病物质主要为荚膜是包围在细菌细胞外

8、的一层粘液状或胶质状物质，含水量大，其他成分多为多糖、多肽或糖蛋白。细菌荚膜染色