《病毒与亚病毒》PPT课件

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1、第三章病毒与亚病毒第一节病毒的性质第二节病毒的研究方法第三节病毒复制第四节病毒的非增殖性感染第五节亚病毒第六节病毒的可利用价值第一节病毒的性质一、形态结构二、病毒的化学组成三、病毒的理化抗性一、形态结构1.形态和大小形态多样,100nm以下。2.结构：核(衣)壳+核酸或包膜（来源于核膜或细胞膜）。衣壳对称类型螺旋对称二十面体对称复合对称二、化学组成（一）病毒的核酸（DNA或RNA）1.正极性和负极性正极性(+RNA)：可作为mRNA。负极性(-RNA)：与其mRNA序列互补。双意RNA：正极性+负极性。DNA：和m

2、RNA互补→-DNA；和mRNA序列相似→+DNA。2.感染性核酸（infectiousnucleicacid）抽提分离的病毒核酸→导入细胞→产生子代毒粒。（二）病毒的蛋白质含量多（40-90%）；种类少（一种或几种）。1.结构蛋白如壳体蛋白、包膜蛋白，主要是保护、参与识别和吸附。2.功能蛋白如溶菌酶、转录酶等、主要参与侵入、释放或复制。（三）、脂类和糖类都来源于细胞；种类和含量同于宿主细胞（磷脂+胆固醇）;注：少数无包膜病毒（T系噬菌体、λ噬菌体等）也有脂类。三、理化抗性1.温度耐冷不耐热，离体，56～60℃，3

3、0min→灭活。保存：低温真空干燥法(-20～-196℃)；适量盐溶液（MgCl2，MgSO4）可提高热稳定性。2.射线击毁病毒核酸。活性染料（如甲苯胺兰、中性红、丫啶橙）渗入并与核酸结合→可见光灭活。3.pH：5.0～9.0稳定。4.脂溶剂破坏包膜，如乙醚、氯彷→分类的依据。5.化学消毒剂对氧化剂（如高锰酸钾、次氯酸盐）敏感；酒精、酸碱、环氧乙烷可杀灭。6.抗生素不敏感，但患病须注射。第二节病毒的研究方法一、分离与纯化二、效价测定一、分离纯化（一）分离1.标本采集与除菌处理（1）采集：有足够活病毒。如倒罐液，感染

4、者血液、分泌物等。（2）除菌处理采用抗生素、离心、过滤等。2.接种与感染表现（1）接种考虑宿主范围、组织嗜性；操作简单、易培养、易判断。注：盲传：第一次接种未出现症状，重复接种。目的：提高效价。盲传二代后，仍未症状→无活病毒。（2）感染表现噬菌斑、坏死斑（枯斑）、蚀斑（空斑）。①噬菌斑（plaque）噬菌体→平板培养物→圆形的透明区域。有一定的形态，用于分离、鉴定和计数。噬菌斑②坏死斑（枯斑）植物病毒→敏感植物叶片→坏损区域。③蚀斑（空斑）动物病毒→细胞单层上→病损区。细胞内部发生“致细胞病变效应”（细胞聚集成团、

5、肿大、融合成多核细胞，有包涵体或裂解）。包涵体(inclusionbody)光镜下可见、圆形、卵圆形或不定形的蛋白质结晶。组成多为病毒颗粒或病毒亚基；少为细胞对感染的反应产物，无病毒粒子。实践应用病毒诊断—大小、形态、数量、组成以及位置→快速鉴别→辅助诊断。用于生物防治—昆虫病毒→多角体（碱性蛋白）→杀虫。（二）、病毒的纯化1.标准（1）保持感染性；（2）大小、形态、密度、组成及抗原性均一。2.方法盐析、等电点沉淀、凝胶层析、离子交换等；超速离心二、效价测定效价：指1mL培养液或试样中病毒感染单位数目（噬菌斑形成单

6、位数或感染中心数）。1.物理颗粒计数：电镜。2.感染性测定：测噬菌斑、枯斑(须用石英砂摩擦叶片)和蚀斑数。底层培养基2-4ml上层培养基0.2ml敏感菌悬液0.1ml噬菌体试样上层培养液噬菌斑37℃，12h双层平板法第三节病毒复制一、病毒的增殖过程二、一步生长曲线（one-stepgrowthcurve）一、病毒的增殖过程（E.coliT4噬菌体）吸附、侵入、生物合成、装配和释放。（一）吸附1.特异性吸附蛋白（VAP）→→细胞受体（细胞生长必须）。2.原理：空间结构的互补性，氢键、疏水性相互作用、范德华力。（二）侵

7、入1.噬菌体：注射。2.动物病毒直穿细胞膜；细胞内吞：累积在细胞质的小泡内→释放；膜融合：包膜和细胞膜融合。3.植物病毒：伤口或口器侵入。（三）生物合成1.特点：时序性。早期转录→→次早期转录→→晚期基因表达。以E.coli的T偶数双链噬菌体为例。早期mRNA早期蛋白(次早期RNA聚合酶)次早期mRNA次早期蛋白(DNA分解酶、DNA、mRNA聚合酶等)晚期mRNA晚期蛋白(衣壳蛋白、装配酶等)核酸(DNA)复制宿主细胞RNA聚合酶dsDNA次早期DNA晚期基因2.核酸复制（1）基本规律双链为半保留，单链先合成互补

8、链，再复制。（2）病毒DNA或RNA的复制双链DNA和双链RNA复制（半保留复制）单链+DNA和+RNA复制先合成负链，再合成正链。单链-RNA复制-RNA→+RNA(即mRNA)→-RNA。逆转录病毒单链RNA复制RNA→DNA→双链DNA→单链RNA。（四）、装配（五）、释放裂解和出芽。二、一步生长曲线（描述烈性噬菌体的复制）1.具体操作敏感菌+噬菌体