《生物样本分析》PPT课件

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1、生物样本分析岛津自动前处理系统（Co-SenseforBALCMS）药代动力学研究的内容药代动力学应用动力学原理研究药物吸收、分布、代谢和排泄过程。药物剂量与药理效应的相互关系研究人体生理及病理状态对药物体内过程的影响药物制剂的生物利用度测定药物相互作用评价生物样品包括各种体液和组织血浆中微量药物或代谢产物的测定药物化学结构的特点世界药物索引1999收载药物总数：51596可离子化药物：62.9%，其中酸性化合物14.5%碱性化合物67.5%两性化合物18.0%分子量一般<500离子化质谱分析血浆样品的特点基质复杂选择性强待测物含量低灵敏度高浓度差异大线性范围宽生物样品中的药物分析

2、前处理的要点除蛋白质，分离纯化浓缩液液萃取法固相萃取法规模缩小的柱色谱法直接沉淀法超滤法血浆样品－加入提取溶媒（酸化或碱化）－涡旋－离心－取上清液－吹氮气浓缩－残渣溶解－过滤进样色谱分析样本前处理一般步骤药代动力学研究面临的挑战高效液相色谱法（HPLC）的特点和局限：灵敏度：定量限一般为10～100ng/ml，选择性差测试速度：每个样品15～20min，低通量对结构分析提供的信息很少需求：灵敏度：

3、次用于生物样品分析1991年，APILC/MS用于药物开发数据来源：AmericanSocietyforMassSpectrometry,2002药物色谱分析中不同方法的比例1990年2000年LC/MS法测定人血浆中克拉霉素的浓度克拉霉素(clarithromycin)红霉素衍生物新一代对酸稳定的口服大环内酯类抗生素以往克拉霉素血药浓度测定多采用微生物法HPLC紫外检测克拉霉素检测条件流动相:0.05%冰醋酸和乙腈（40∶60v/v）流速:0.2mL/min色谱柱:Shim-packODS150mm×2.0mmI.D.5μm柱温:40℃质谱离子化方式：电喷雾离子化（ESI）离子极

4、性:Positive；选择性离子检测(SIM):克拉霉素m/z:748.5[M+H]+罗红霉素m/z:837.5[M+H]+内标物14-羟基克拉霉素m/z:764.5[M+H]+血浆样品的处理血浆样品,内标罗红霉素,碳酸钠溶液碱化后乙醚提取,上清液用氮气吹干。最后残渣乙腈溶解。方法的专属性克拉霉素、内标、14-羟基克拉霉素的保留时间分别为1.93min、1.93min、1.92min岛津自动前处理系统（Co-SenseforBALCMS）内容自动前处理的优点与问题自动前处理系统Co-SenseforBA的特长采用新型色谱柱和稀释系统实现了高回收率使用新型色谱柱的自动浓缩系统实现了高

5、灵敏度Co-SenseforBA+LCMS系统的特长背景样品前处理是目前分析化学的瓶颈，是分析化学研究的难点和热点问题之一。由于样品数量极多，且分析物含量越来越低、基体越来越复杂，迫切要求发展高通量、高选择性、高效率的在线样品前处理技术。因此，开展这方面的研究具有极为重要的意义。HPLC/LC-MS广泛应用于血浆或血清的代谢物分析和原药分析，一般的血浆和血清分析，需要对样本进行预处理，以除去蛋白质，这样会降低精确度和工作效率。引入了具有限制性通路媒介（restrictedaccessmedia-RAM）的预柱，可对血浆样本进行直接分析，而不必进行预处理。这样，可提高精确度、简化操作

6、和提高工作效率。但是，使用限制性通路媒介柱，也存在一些问题，需解决的问题：回收率、灵敏度、耐用性。生物样品中的药物分析前处理的要点除蛋白质浓缩手工前处理的问题处理时间重现性药物回收率前处理的现状除蛋白、浓缩操作自动化的优点提高分析精度脱线处理时，难以保持操作完全一致，有时分析精度变差。提高操作简便性脱线处理时需操作熟练提高处理效率夜间可自动运行，大幅度地提高了处理效率前处理自动化的课题提高回收率及提高浓缩率自动前处理的优点和课题提高回收率的手段有必要使与蛋白质结合的药物游离出来与蛋白质结合的药物，在除蛋白质处理时，药物也与蛋白质一起被除去，药物回收率降低。切断蛋白质结合（离子结合，

7、疏水结合）调整样品导入溶液的pH值碱性药物时，使用pH值低的溶液酸性药物时，使用pH值高的溶液调整样品导入溶液的离子强度20-100mM的缓冲液浓度在样品导入溶液中添加有机溶剂在20%以内使用有机溶剂（防止由蛋白质的变性而产生的析出）使用界面活性剂(*)从药物保持（使用反相柱）的方式看，有抑制药离子化的pH值较为理想。方法我们研究开发出优质的限制性通路媒介（RAM）预柱，应用柱切换HPLC系统及其在线稀释旁路系统，可对血浆直接进行药物分析。我们的系统….回收率即使