资源描述：
《抗氧化性测定方法》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、3.2.3冬枣多酚含量的测定（1）福林-肖卡试剂（Folin-ciocalteu）的配制称取100克钨酸钠和25克钼酸钠，将两者溶于700mL水中，倒入2L的圆底烧瓶中，再加入50mL85%的磷酸和100mL浓盐酸，放入几粒玻璃珠，给烧瓶连上回流冷凝器，用文火回流10h（可不连续）;回流后用50mL蒸馏水冲洗冷凝管上的附着物，然后取下，加150克硫酸锂和几滴溴水（边加边摇直至溶液变黄），加热煮沸15min，（注：最后的颜色应是黄色，不带丝毫的蓝色绿色，发绿即不得使用）。冷却后转移到1L的容量瓶中，用水
2、定容至刻度，过滤贮存于棕色瓶中备用（2）多酚标准曲线的绘制取洁净干燥试管7支，分别标号0-6，分别加入预先配制的0.4mg/mL的没食子酸0，0.05，0.1，0.15，0.2，0.25，0.35mL，再分别加入双蒸水，2，1.95，.1.9，1.85，1.8，1.75，1.7，1.65mL。将储存备用的福林肖卡试剂稀释3倍，于7支试管中分别加入1mL，将7支试管振荡摇匀，静置3-4min，再于7支试管中分别加入10%的碳酸钠各1mL，放入25℃恒温水浴中2h。进行全波长扫描，在765nm处有最大吸收
3、波长，在此波长下测定不同浓度标准溶液的吸光值，绘制多酚浓度与吸光度的标准曲线。（3）测定将上述八种原液稀释相应倍数之后，各取0.1mL于试管中，在各加入1.99mL双蒸水，其余操作同标准曲线绘制，于765nm波长处测定吸光值。2.3.2多酚含量测定2.3.2.1多酚标准曲线的制作[5]准确称取没食子酸标准品200mg，加少量70%乙醇将样品溶化，用70%乙醇定容至100mL，摇匀，静置。再用移液器吸取20mL，用70%乙醇定容至100mL，摇匀，配成浓度为400µg/mL的没食子酸标准溶液，待用。准确
4、吸取浓度为的没食子酸标准溶液0,0.05,0.1,0.15,0.2,0.25,0.35ml于试管中。分别加入蒸馏水2.0,1.95,1.9,1.85,1.8,1.75,1.65ml，再各加入福林试剂1ml,充分振荡后静置3-4min:，分别加入10%碳酸钠1ml于25℃，摇匀置于恒温水浴中反应2h,同时做试剂空白，于765nm下测定吸光度，以含量对吸光度进行直线回归，计算回归方程。2.3.2.2试样多酚含量的测定将提取液离心，取上清液，按标准曲线绘制的测定方法，依次加入试剂，以试剂空白作参比，用1cm
5、比色皿在765nm处测定吸光度，计算多酚含量。2.2.3.1总还原能力测定(铁氰化钾还原法)[19][20]还原力法的原理为：K3Fe(CN)6+样品→K4Fe(CN)6+样品氧化物K4Fe(CN)6+Fe3+→Fe4[Fe(CN)6]3在波长700nm条件下测定吸光度A，A越大，则样品的还原力越大。在2.5mlpH=6.6磷酸缓冲溶液中加分别入芦丁标准溶液（0.6mg/ml）：0、0.05、0.1、0.15、0.2、0.25、0.3ml，双蒸水1、0.95、0.9、0.85、0.8、0.75、0.7
6、ml，再加入1%铁氰化钾1ml，混合物在50℃恒温条件下，加热20min。急速冷却，加2.5ml10%三氯乙酸，3500转/分离心分离10min。取上层清液2、5ml、双蒸水2、5ml，再加0、5ml0.1%FeCl3，混合均匀，静置10min后在波长700nm下测吸光度A值,绘制标准曲线。样品测定：分别取720mg/ml的提取液、维生素C、TBHQ、BHT溶液0.5ml代替芦丁标准溶液，其他操作同标准溶液的绘制，测定吸光度。结果如图12、13所示。2.2.3.2清除DPPH自由基的能力测定[20]D
7、PPH·在有机溶剂中是一种稳定的自由基，其结构中含有3个苯环，1个氮原子上有1个孤对电子，呈紫色，在517nm有强吸收。有自由基清除剂存在时，DPPH·的单电子被配对而使其颜色变浅，在最大吸收波长处的吸光度变小，而且这种颜色变浅的程度与配对电子数是成化学剂量关系的,因此可用于检测自由基的清除情况，从而评价实验样品的抗氧化能力。取0.04mg/ml的DPPH-乙醇溶液1.5ml，加入适量提取液用95%乙醇补足3ml。静置30min，在517nm处测定吸光度。同时测定维生素C、合成抗氧化剂TBHQ对DPP
8、H自由基的清除率，作为对比。清除率=[1-(A1-A2)/A0]×100其中：A1为加提取液后DPPH溶液的吸光度；A2为提取液的吸光度；A0为未加提取液时DPPH溶液的吸光度。结果如图14所示。2.2.3.3清除羟自由基作用的测定[20][21]通过Fenton反应产生·OH，水杨酸捕获·OH产生有色物质，该物质在510nm有特征吸收，通过测定水杨酸捕获·OH所得到的产物，确定·OH的清除率。在10ml试管中加入一定浓度的待测液，然后加入0.3ml6m
