黄瓜未授粉子房胚状体诱导及植株再生研究

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1、黄瓜未授粉子房胚状体诱导及植株再生研究李建欣，葛桂民，庞淑敏，方贯娜，吴小波，周海霞（郑州市蔬菜研究所，郑州450015）摘要：对3个品种黄瓜的未授粉子房进行胚状体诱导和植株再生试验，结果表明：3个品种都获得了再生植株。不同品种、不同热处理时间和不同TDZ浓度以及外植体的切割方式对胚状体诱导率都有影响。不同品种及不同6-BA和NAA浓度组合对植株的再生率有影响。热处理3d,外植体为条状，TDZ浓度在0.06～0.08mg·L-1时这3个品种的胚状体诱导率较高。NAA浓度为0.05mg·L-1，6-BA浓度为0.4～0.6mg·L-1时有利于胚状体分化植株。关键词：黄瓜；未授粉子房

2、；胚状体；再生植株InVitroCultureandPlantletRegenerationfromunpollinatedovaryofCucumissativusL.LiJian-xin,GeGui-min,PangShu-min,FangGuan-na,WuXiao-bo,ZhouHai-xia(ZhengzhouVegetableResearchInstitute,Zhengzhou450015,China)Abstract:ThestudyaimedontheinductionofembryoidandregenerationofthreevarietiesofCucu

3、missativusL.Theresultshowedthatplantsregenerationwereobtainedinthreevarietiesofcucumber.Varieties,heat-treatedtime,concentrationofTDZandshapeofexplantshadeffectiononthefrequencyofembryoidinduction.Differedvarietiesanddifferentconcentrationcombinationsof6-BAandNAAhadeffectiononthefrequencyofpl

4、antregeneration.Heat-treatedforthreedays,sticksofexplantsandconcentrationofTDZwas0.06-0.08mg·L-1hadhighfrequencyofembryoidinduction.ItwasfavourabletoregenerationseedlingsfromembryoidwiththeconcentrationofNAAwas0.05mg·L-1and6-BAwas0.4-0.6mg·L-1.Keywords:CucumissativusL.；Unpollinatedoveries；Emb

5、ryoid；Regenerationplant在黄瓜常规杂交育种中，杂交后代自交系的纯合往往需要5～7年，利用未授粉子房培养快速获得纯系是加速黄瓜育种的有效途径。对黄瓜未授粉子房培养的研究国内外已有成功的报道。Gémes-Juhász等[1]研究表明，35℃热激处理有利于胚状体的发生，并得到了再生单倍体植株。杜胜利等[2]研究认为黄瓜未授粉子房培养体系单倍体植株的再生频率为25%。陈小鹏等[3]报道了黄瓜未授粉子房培养的一些影响因素，如蔗糖浓度、取样时间和TDZ浓度对胚状体发生的影响。刁卫平等[4]研究结果表明处于开花前2～3d的子房胚发生率相对较高，达83.8%，对子房进行35

6、℃热激处理3d的胚状体的发生率较高，诱导培养基中添加AgNO3可以提高胚发生率，并获得了单倍体植株。王璐[5]等研究认为25℃下启动雌核发育的最适TDZ浓度为0.02mg·L–1，反应率可达90.1%，本试验在以上研究的基础上对黄瓜未授粉子房胚状体的诱导和植株的再生进行了研究，为其在育种上的应用提供参考。1材料与方法1.1试验材料供试材料为3个黄瓜杂交种：津优3号、津绿21、夏炎，由郑州市蔬菜研究所黄瓜课题组提供。2011年春季和秋季在郑州市蔬菜研究所内进行。1.2试验方法1.2.1外植体的准备与培养在盛花期取长势旺盛植株上开花前1～3d的未授粉雌花瓜条，在超净工作台上用75%乙

7、醇表面消毒30s，用5%次氯酸钠灭菌20min，再用无菌水冲洗4次。用手术刀片将消毒过的瓜条削去表皮，切成0.3cm厚的薄片或1cm长的瓜条，使子房暴露，接种到诱导培养基上黑暗条件下热激处理。每个子房接种1～2个培养皿（规格：6cm×1.5cm）。2～7d后可观察到子房上有球形突起，并将其转到分化培养基上进行胚的分化和植株的再生，最后对再生植株驯化和移栽。胚状体的诱导和植株再生采用CBM培养基[1]，诱导培养基添加蔗糖40g·L–1，植株再生培养基添加蔗糖30g·L–1，琼脂粉均