实验十九根瘤或土壤中固氮酶活性的测定

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1、实验十九根瘤或土壤固氮酶活性的测定2021/7/20根瘤或土壤固氮酶活性的测定目的要求实验材料实验程序思考题目的要求初步掌握根瘤或土壤样品中固氮酶活性测定的方法实验材料豆科植物根瘤或土壤样品。102G型气相色谱仪/标准乙烯灵敏度为103，衰减为1/128。待测样品中乙烯测定：灵敏度为104，衰减为1/1。（但可根据固氮酶活性，改变灵敏度和衰减）。乙炔气体。100mL带有异丁基胶塞的血清瓶。1mL、10mL（密封性能好的）注射器，100mL微量注射器实验程序根瘤固氮活性的测定土壤固氮酶活性的测定乙烯含量的计算实验程序Ⅰ（根瘤固氮活性的测定）从

2、田间挖取豆科植物植株，剪掉地上部分，根部洗净，稍干，将结瘤的根系部分分别剪开，主根上的瘤可直接剥下，侧根上的瘤要带少量根剪断，将鲜根瘤称重，收集到100mL血清瓶中，立即用异丁基胶塞密封，然后按瓶子中气相体积用注射器从瓶中抽出5—10%的空气，再用注射器注入等体积的C2H2，280C保温2h。取出瓶子，用注射器吸出100uL的混合气体，用气相色谱仪以外标法测定其固氮酶活性。实验程序Ⅱ（土壤固氮酶活性的测定）取田间土样15g于100mL血清瓶中，加入0.1mole/L葡萄糖液2mL，摇匀，塞上异丁基胶塞，加铝盖密封。用注射器从瓶中抽出5mL乙

3、炔气体，280C培养2d。培养结束后，用1mL注射器从瓶中吸出0.5mL气样，用气相色谱仪测定其固氮酶活性。实验程序Ⅲ（乙烯含量计算）因乙烯峰高与气体中乙烯含量成正比，故可用外标法来测定待测样品中乙烯的量。由乙烯含量的百分比，再根据血清凭中气相体积计算mmoles数：固氮酶活性用形成nmoles/mg瘤鲜重或g干土/min表示。X100测样中乙烯含量（%）=标准乙烯气体含量（%）X测样中乙烯气体峰高（mm）标准乙烯气体峰高（mm）纯乙烯体积（L）=测样中乙烯含量百分比X气相体积（L）乙烯形成量（nmoles）=纯乙烯气体体积（L）X1092

4、2.4（L）思考题固氮酶活性测定的原理是什么？为什么测定时要用带异丁基胶塞密封的血清瓶？用气相色谱仪时应注意哪些重要环节？实验十九结束2021/7/20