实验五：分枝杆菌、铜绿假单胞菌

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1、实验五：分枝杆菌铜绿假单胞菌霍乱弧菌实验目的掌握结核分枝杆菌的基本特征和常用鉴定方法。掌握临床标本中检查抗酸杆菌的方法。实验内容1、示教：卡介苗（减毒结核分枝杆菌）在罗氏培养基上的生长表现。2、痰标本直接涂片检查抗酸杆菌：抗酸染色法。示教：卡介苗（减毒结核分枝杆菌）在罗氏培养基上的生长表现。改良罗氏培养基是专门用于分枝杆菌的分离培养的，主要成分为甘油、鸡蛋液、马铃薯粉、孔雀绿。结核分枝杆菌的培养特性：1、懒：初次分离需2-8周才能看到菌落，一代需要18小时。2、馋：营养要求高，专性需氧。3、丑：菌

2、落呈菜花样，干燥、粗糙、灰白或灰黄，凸起。痰标本直接涂片检查抗酸杆菌涂片：标本经适当处理后直接涂片或厚膜涂片。用接种环直接挑取标本中脓性或干酪样部分痰，制成20MMX25MM大小的均匀薄涂片，或经多次薄涂片制成厚涂片。自然干燥后火焰固定。抗酸染色：1、初染：将涂片用夹子夹住，表面覆盖一层吸水纸，滴加石碳酸复红，并在载玻片下方用弱火加热至出现蒸汽（勿煮干或煮沸），随时补充染料以防干涸，持续5分钟，水洗。2、脱色：用3%盐酸酒精脱色，直至无红色染液脱下，水洗。3、复染：用美兰染1分钟，水洗，吸干，在油镜下

3、观察。结果观察：淡蓝的背景下可见染成红色的细长或略带弯曲的杆菌，有分枝生长趋向，此即为抗酸阳性杆菌，其他细菌或细胞被染成蓝色，根据各实验室的标准报告：-，+，+，++，+++，++++。结核分枝杆菌镜下形态铜绿假单胞菌的鉴定1、培养特点及菌落特征：在普通琼脂平板上产生特征性的蓝绿色水溶性绿脓素和黄绿色青脓素，血平板上形成大而扁平，湿润，边缘不齐，有金属光泽，有生姜气味的灰绿色菌落，并形成透明溶血环。2、95%以上的铜绿假单胞菌可通过观察以下几个特征而得到鉴定：氧化酶阳性（10秒内）。菌落较大，生姜样气

4、味。绿脓素产生。少数铜绿假单胞菌可产生其他颜色色素，如红脓素（红色），黑脓素（棕色到黑色），青脓素（黄色）。霍乱弧菌