《工业发酵灭菌》PPT课件

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1、工业发酵灭菌知识目标理解工业发酵常用灭菌方法的原理和适用范围掌握工业发酵培养基和发酵设备灭菌工艺的选择掌握无菌空气制备的基本知识和典型工艺要求一、热灭菌法1、火焰灭菌法直接在火焰上灼烧灭菌，如接种针和一些金属小工具、试管口、三角瓶口等灭菌采用这种方法，该方法简单有效，但局限性很大。2、干热灭菌法进行干热灭菌时，微生物细胞发生氧化，微生物体内蛋白质变性和电解质浓缩引起中毒等作用，其中氧化作用导致微生物死亡是主要依据。由于微生物对干热的耐受力比对湿热强得多，故干热灭菌所需的温度要高，时间要长，一般160～170℃，1～1.5h。实际应用时，对一

2、些要求保持干燥的实验器具和材料可以采用干热灭菌法。湿热灭菌法利用饱和蒸汽进行灭菌的方法称为湿热灭菌法。其原理是借助于蒸汽释放的热能使微生物细胞中的蛋白质、酶和核酸分子内部的化学键，特别是氢键受到破坏，引起不可逆的变性，使微生物死亡。由于蒸汽有很强的穿透能力，湿热蒸汽存在潜热。蒸汽来源方便，价格低廉，灭菌效果可靠，是目前最为常用的灭菌方法。一般的湿热灭菌条件为121℃，30min。湿热灭菌法煮沸灭菌法将要消毒的物品放入水中煮沸（100℃）15～20min，一般微生物的营养细胞都可以杀死，但不能杀死芽孢。巴氏消毒法法国微生物学家、化学家巴斯德首

3、创的低温消毒法。加热到62℃，经过30分钟，以杀死不耐高温的物质中的微生物和病原体的消毒法。牛奶、啤酒、黄酒、酱油和醋等用此法消毒。湿热灭菌法间歇灭菌法反复几次的常压蒸汽灭菌，以达到杀死微生物营养体和芽孢的目的。操作步骤：100℃，30-60min；37℃，1d；同上重复三次…适用于不宜高压灭菌的物质，如糖类明胶牛奶培养基。方法简单，但却麻烦；工作周期长。湿热灭菌法高压蒸汽灭菌法使用密闭的高压蒸汽灭菌锅，使灭菌锅内蒸汽不外溢，增加压力，由于压力的增高，温度也随之增高，从而提高杀菌力，缩短灭菌时间。最有效而广泛应用的灭菌方法实验室常用的是0.

4、1MPa，121℃，15～30min应用范围培养基，水，发酵罐等其他不适合干热灭菌的物品。高压蒸汽灭菌法的注意事项：完全排除锅内冷空气灭菌完毕后要缓慢减压压力降为零后打开盖子二、辐射灭菌法利用高能量的电磁辐射和微粒辐射来杀死微生物以紫外线最常用。紫外线对芽孢和营养细胞都能起作用，但细菌芽孢和霉菌孢子对紫外线的抵抗力强。紫外线的穿透力低，仅适用于表面灭菌和无菌室、培养间等空间的灭菌，且距照射物不超过1.2m；对固体物料灭菌不彻底，也不能用于液体物料的灭菌。三、化学药品灭菌法某些化学药品与微生物发生反应（蛋白变性、酶失活、细胞通透性）而具有杀菌

5、的作用。化学药剂适于生产车间环境的灭菌，接种操作前小型器具的灭菌等，不适用于培养基。化学药品的灭菌使用方法，根据灭菌对象的不同有浸泡、添加、擦拭、喷洒、气态熏蒸等。⑴高锰酸钾高锰酸钾溶液的灭菌作用是使蛋白质、氨基酸氧化，使微生物死亡，一般用0.1％～0.25％的溶液。⑵漂白粉漂白粉的化学名称是次氯酸盐(次氯酸钠，NaOCl)，它是强氧化剂，也是廉价易得的灭菌剂。它的杀菌作用是次氯酸钠分解为次亚氯酸，后者不稳定，在水溶液中分解为新生态氧和氯，使细菌受强烈氧化作用而导致死亡，对杀死细菌和噬菌体均有效。⑶75％酒精溶液75％酒精溶液的杀菌作用在于

6、使细胞脱水，引起蛋白质凝固变性。对营养细胞、病毒、霉菌孢子均有杀死作用，但对细菌的芽孢杀死作用较差。常用于皮肤和器具表面杀菌。⑷新洁尔灭新洁尔灭是表面活性剂类洁净消毒剂。它在水溶液中以阳离子形式与菌体表面结合，引起菌体外膜损伤和蛋白变性。10min能杀死营养细胞，但对细菌芽孢几乎没有杀灭作用。一般用于器具和生产环境的消毒，不能与合成洗涤剂合用，不能接触铝制品。⑸甲醛甲醛(HCHO)是强还原剂，它能与蛋白质的氨基结合，使蛋白质变性，对氨基和蛋白质的变性有较强活性，这是用甲醛作为灭菌剂的根据。使用时可以以2份37％甲醛溶液与1份KMnO4混合，

7、或者将37％甲醛溶液直接加热，产生气态甲醛用于灭菌。甲醛灭菌的缺点是穿透力差。⑹过氧乙酸过氧乙酸是强氧化剂，它是广谱、高效、速效的化学杀菌剂，对营养细胞、细菌芽孢、真菌孢子和病毒都有杀灭作用。⑺戊二醛在酸性条件下，不具有杀死芽孢的能力，只有在碱性条件下，才具有杀死芽孢的能力，常用2％的溶液，常用于器具、仪器和工具等灭菌。⑻酚类苯酚毒性较大，易污染环境，且水溶性差，使应用受到限制，而酚类衍生物的使用，扩大了作为消毒剂的使用范围。四、臭氧灭菌利用臭氧的氧化作用杀死微生物细胞。氧化分解葡萄糖所必需的酶，从而直接破坏其细胞膜，从而将细菌杀死。无污染

8、消毒剂对细菌、霉菌等杀菌效果好安全，杀菌效果明显，安装灵活等特点用于洁净室、净化设备的消毒。五、过滤除菌法利用过滤方法阻留微生物，也可达到除菌的目的，这就是过滤除菌法。此法仅适用