SNT2868-2011 西尼罗病毒病检疫技术规范.pdf

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1、版权所有·禁止翻制、电子发售中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛犖／犜２８６８—２０１１西尼罗病毒病检疫技术规范犙狌犪狉犪狀狋犻狀犲狆狉狅狋狅犮狅犾犳狅狉狑犲狊狋狀犻犾犲犳犲狏犲狉２０１１０５３１发布２０１１１２０１实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局版权所有·禁止翻制、电子发售犛犖／犜２８６８—２０１１前言本标准按照ＧＢ／Ｔ１．１—２００９给出的规则起草。本标准参考了国际动物卫生组织（ＯＩＥ）的《诊断试验和疫苗标准手册》（２００８版）（ＭａｎｕａｌｏｆＤｉａｇｎｏｓｔｉｃＴｅｓｔａｎｄＶａｃｃｉｎｅｓｆｏｒＴｅｒｒｅｓｔｒｉａｌＡｎｉｍａｌｓ）２

2、．１．２０章和有关行业标准、文献制定，补充了ＲＴＰＣＲ和实时荧光ＲＴＰＣＲ的检测方法。本标准由国家认证认可监督委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国上海出入境检验检疫局、中华人民共和国江苏出入境检验检疫局、中华人民共和国云南出入境检验检疫局。本标准主要起草人：邱璐、李健、姜焱、熊炜、周晓黎、蒋静、胡永强。Ⅰ标准分享网www.bzfxw.com免费下载版权所有·禁止翻制、电子发售犛犖／犜２８６８—２０１１西尼罗病毒病检疫技术规范１范围本标准规定了西尼罗病毒病临床诊断和实验室诊断。本标准适用于西尼罗病毒病病原及抗体的检测。２规范性引用文件下列文件对于本文件的应

3、用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。ＧＢ／Ｔ６６８２分析实验室用水规格和试验方法３临床诊断３．１发病症状人和马感染后，多数不出现症状，部分感染者发生伴有类似流感症状的西尼罗热，少量严重的病例出现高热、剧烈头痛、颈项强直、昏迷、抽搐等中枢神经系统体症，发生西尼罗脑炎，甚至死亡。３．２流行病学西尼罗病毒（ｗｅｓｔｎｉｌｅｖｉｒｕｓ，ＷＮＶ）为单链ＲＮＡ病毒，属黄病毒科黄病毒属。病毒呈球形，基因组编码三种结构蛋白（Ｃ、ｐｒＭ和Ｅ蛋白）与七种非结构蛋白。西尼罗病毒在抗原性上与同属黄

4、病毒的日本乙型脑炎病毒、圣路易斯脑炎病毒、Ｋｕｎｊｉｎ病毒、登革病毒相似，在血清学检测时，易产生交叉反应。西尼罗病毒于１９３７年首次分离，经蚊媒传播可引起人类或动物的西尼罗热及西尼罗脑炎。鸟类、马、人等哺乳动物都是易感动物。其中鸟类是主要的储存宿主。该病在２０世纪５０年代～９０年代都曾有过流行，特别是２０世纪９０年代以后，流行区呈扩大趋势，范围遍及非洲、欧洲、中东、西亚、中亚、大洋洲和北美洲等广大地区。目前我国尚无该病流行的报道，但随着全球气候变暖，疫源地旅行传播以及生物媒介等潜在因素的存在，为西尼罗病毒的传播提供了可能。加之该病毒目前在我国周边国家如印度、俄罗斯南部、

5、东南亚等国已有报道，我国人群普遍缺乏对该病毒的免疫力，一旦传入，将导致严重的公共卫生灾难。４实验室诊断４．１西尼罗病毒犚犜犘犆犚、实时荧光犚犜犘犆犚检测及套式犘犆犚检测４．１．１方法介绍可以进行西尼罗病毒核酸检测。本标准提供的三种核酸检测方法可以根据具体情况选择采用。ＰＣＲ试验的前处理操作可以在ＢＳＬ２实验室进行。在对人、活动物或尸体进行取样时，采样人员应佩戴个人防护设施，穿戴防护衣，佩戴防护口罩、面罩、手套。１标准分享网www.bzfxw.com免费下载版权所有·禁止翻制、电子发售犛犖／犜２８６８—２０１１４．１．２设备、材料和试剂４．１．２．１设备、材料４．１

6、．２．１．１ＰＣＲ仪。４．１．２．１．２实时荧光ＰＣＲ检测仪。４．１．２．１．３电泳仪。４．１．２．１．４凝胶成像分析系统。４．１．２．１．５高速台式冷冻离心机。４．１．２．１．６普通台式离心机。４．１．２．１．７匀浆器。４．１．２．１．８微量可调移液器。４．１．２．１．９无ＲＮａｓｅ的离心管、吸头和无ＲＮａｓｅ的玻璃容器。４．１．２．２试剂除特别说明以外，本标准所用试剂均为分析纯，所有试剂均用无ＲＮａｓｅ污染的容器（用ＤＥＰＣ水处理后高压灭菌）分装。试验用水应符合ＧＢ／Ｔ６６８２规定。４．１．２．２．１裂解液：Ｔｒｉｚｏｌ或其他。４．１．２．２．２异丙醇。４．１．２．

7、２．３犜犪狇ＤＮＡ酶。４．１．２．２．４７５％乙醇：用新开启的无水乙醇和ＤＥＰＣ水配制，－２０℃预冷。４．１．２．２．５ｄＮＴＰ：含ｄＡＴＰ、ｄＴＴＰ、ｄＣＴＰ、ｄＧＴＰ各１０ｍｍｏｌ／Ｌ。４．１．２．２．６逆转录酶。４．１．２．２．７ＤＥＰＣ水：用ＤＥＰＣ处理后的水。４．１．２．２．８５０×ＴＡＥ缓冲液。４．１．３采样、送检和处理４．１．３．１人员样本采集４．１．３．１．１采集来自于疫区的人员、入境可疑人员、申请检验人员的血液。４．１．３．１．２采集怀疑死于西尼罗病人员的血液、脑髓液、组织样品，特别是脑组织和神经组织样品。４．１．３．２