GBT27518-2011 西尼罗病毒病检测方法.pdf

《GBT27518-2011 西尼罗病毒病检测方法.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、ICS11．220B41缮亘中华人民共和国国家标准GB／T27518—20112011-11—21发布西尼罗病毒病检测方法Diagnosticofwestnilevirusinfections2012-03-01实施丰瞀鹳鬻瓣警襻瞥霎发布中国国家标准化管理委员会况19标准分享网www.bzfxw.com免费下载前言GB／T27518—2011本标准按照GB／T1．12009给出的规则起草。本标准由中华人民共和国农业部提出。本标准由全国动物防疫标准化技术委员会(sAc／Tc181)归口。本标准起草单位：中华人民共和国北

2、京出入境检验检疫局、北京百欧赛地生物工程技术开发中心。本标准主要起草人：杨秀娟、孙福军、丁若愚、田茵、田睿、王飞、杨静。标准分享网www.bzfxw.com免费下载1范围西尼罗病毒病检测方法GB／T27518—2011本标准规定了西尼罗病毒的反转录聚合酶链反应(ReverseTranscriptionPolymeraseChainRe—action，RT—PCR)、蚀斑减少中和试验(PlaqueReductionNeutralizationTest，PRNT)和西尼罗病毒的分离方法。本标准适用于易感动物的西尼罗病毒病

3、的检测。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB／T6682分析实验室用水规格和试验方法3缩略语下列缩略语适用于本文件。ABTSdiammonium2，2'-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline一6一sulfonate)：2，2’一连氮基一双一(3-乙基苯并二氢噻唑啉一6一磺酸)二铵盐AMV：鸟类成髓细胞白血病病毒(avianmyeloblastosisv

4、irus)BSA：牛血清白蛋白(bovineserumalbumin)CPE：细胞病变效应(cytopathiceffect)cDNA：互补DNA(complementaryDNA)DEPC：焦碳酸乙二酯(diethylpyrocarbonate)DNAdeoxyribonucleicacid：脱氧核糖核酸dH2O：双蒸水(doubledistilledwater)dNTP：脱氧核苷酸三磷酸(deoxy—ribonucleosidetriphosphate)含有dCTP、dGTP、dATP、dTTP四种脱氧核糖核苷E

5、DTA：乙二胺四乙酸(ethylenediaminetetraaceticacid)6一FAM：6一羧基荧光素(6一carboxyfluorescein)HEPES：羟乙基呱嗪乙硫磺酸(N一2一hydf。xyethylpiperazine—N—ethane-sulphonicaeid)MEM：基础培养基(minimaessentialmedium)OligodT：多聚T再加上--4,段随机碱基(几个碱基)构成的引物，用于RT-PCRPBS：磷酸盐缓冲生理盐水(phosphatebelancedsolution)PFU

6、：蚀斑形成单位(plaqueformingunits)PRNT：蚀斑减少中和试验(plaquereductionneutralizationtest)RNA：核糖核酸(ribonucleicacid)RNasin：核酸酶抑制剂(RNAenzymeinhibitor)TAE：醋酸盐EDTA(tris-acetate—EDTATris)】标准分享网www.bzfxw.com免费下载GB／T27518—2011Taq酶：耐热DNA聚合酶(thermusaquaticuspolymerase)TAMRA：四甲基罗丹明(car

7、boxytetramethylrkodamine)TRIzul：一种新型总RNA抽提试剂(trizolreagent)，可以直接从细胞或组织中提取总RNAVero细胞：非洲绿猴肾细胞wNV：西尼罗病毒(westnilevirus)4试剂4．1水：符合GB／T6682中一级水的规格，用DEPC处理以除掉RNA酶。4．2TRIzM试剂或其他等效的商品化RNA抽提试剂。4．3AMV逆转录酶：20U／uL，一20℃保存，不要反复冻融或温度剧烈变化。4．45×AMVBuffer：AMV逆转录酶的缓冲液。4．5RNasin：20

8、U／uL，一20℃保存，不要反复冻融或温度剧烈变化。4．6Oligo(dT)：FT--PCR的引物。4．710×TaqBuffer：Taq酶的缓冲液。4．8Taq酶：一20℃保存，不要反复冻融或温度剧烈变化。4．9dNTP三磷酸脱氧核糖核苷，含dCTP、dGTP、dATP、dTTP各10mmoL／L。4．10琼脂糖：电泳级。4．11三氯甲烷：分