AriaII操作手册-分选20160402

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1、FACSAriaⅡ中文操作手册FACSAriaⅡ流式细胞仪一、开机准备（一）准备液路1.将流式细胞仪的上盖打开；2.开启计算机，等待所有程序载入。3.开主机电源Mainpower（右图），从电脑桌面上双击打开FACSDiva软件，输入密码BDIS。打开激光开关laserpower（根据实验需要进行选择）；开启实验所需激光器电源。4.确认液流车中各种液体的液面水平（鞘液、废液、去离子水、漂白剂、乙醇），倒空废液或加满其他液体（下图）。5.从软件的Cytometer菜单上选择FluidicStartup(射流启动)，点击OK确认。40FACSA

2、riaⅡ中文操作手册将出现如下窗口：6．将液路和气路管道从酒精桶断开，连接到鞘液桶；完成后点Done；7．将Closed-loop喷嘴（闭环喷嘴）插入流动室；完成后点Done；会出现右侧窗口，提示液流开启进行中；8．达到100%，移去Closed-loop喷嘴，完成后点Done；9．按照实验要求，插入直径合适的喷嘴（喷嘴直径应该是分选颗粒直径的3-6倍）；10．然后点OK，完成整个过程；40FACSAriaⅡ中文操作手册11．从菜单上选择Sort(分类)>sortsetup,确认setup模式与喷嘴大小匹配。（二）开液流1．打开液流窗口的液

3、流；¨点击软件界面上（如下图）的按钮打开分选液流窗口（如下图）¨点击分选液流窗口的按钮(stream的前面按钮)，开启液流40FACSAriaⅡ中文操作手册1．打开分选仓前的门，检查液流。液流应为一条细线落入废液槽正中(可通过调整红色标志的键)；（如果液流不稳，检查流动室中是否有气泡，将液流关闭，10秒钟后再开，排除气泡。）2．关上分选仓前的门。（三）设定液流断点1.调整液流震幅（Ampl），使断滴位于窗口上方1/3处。（Ampl不要超过70，如果超过，检查流动室是否有气泡；确认鞘液压力和震动频率是否合适）；2.确认卫星液滴与大液滴融合，应

4、该在断滴的6滴之内融合（红色箭头数起，左图的左侧合格，右侧不合格），如果没有融合，重新安装喷嘴。40FACSAriaⅡ中文操作手册二、建立实验模板1.在软件界面左侧Browser面板下，依次点击NewFolder、Experiment、Specimen（均可重命名），单击Specimen左侧“+”符号，显示下方的Tube，点击左侧灰色指示箭头，使之变成绿色（当前指示）。2.在软件（）Cytometer面板上，点击Parameters选项卡，选择实验所需荧光通道（按Ctrl键可多选），并删除多余通道。选择荧光素名称、信号放大类型（log/li

5、n）、信号脉冲类型（H/A/W），40FACSAriaⅡ中文操作手册3.在()右侧worksheet页面中，画出实验所需模板(斜箭头)：首先画出点图（双参数：FSC-A和SSC-A），根据阴性对照（未染色的细胞）圈出细胞群P1；其次画出点图（双参数：荧光名称），利用鼠标右键ShowPopulations选项，选择P1，建立图之间的联系(如下图)。4.至此，一个简单的实验模板基本建成。现在可以将样本管放在上样台上，点击上样面板的load，此时AcquireData自动被激活或手动点击采集控制面板上的Acqiredata按钮，仪器开始获取样本数

6、据。40FACSAriaⅡ中文操作手册5.根据实验情况调整Cytometer面板中各通道电压，使FSC/SSC中信号位于利于观察的位置（细胞群落在中央位置）。调整阈值（Threshold），去除碎片和噪音信号。调整上样速度（FlowRate）（最大为10）。40FACSAriaⅡ中文操作手册6.在FSC/SSC中调整门的位置、大小和形状，使之圈住感兴趣细胞群。调节荧光通道的电压，使荧光信号位于合适的位置。7.在鼠标右键中打开数据显示，观察实验的实时结果。8.实验条件调整完毕后，在上样面板中设置EventsToRecord等参数，点击Reco

7、rdData，开始保存数据。40FACSAriaⅡ中文操作手册（三）液流关机预备关机1．关激激光电源；2．从上样架上移去上样管；3．关闭液流(stream的前面按钮)；4．倒空废液桶；5．加满酒精桶关机1．从菜单上选择Cytometer>fluidicsshutdown（关闭），会弹出下面窗口2．从流动室上移去喷嘴；完成后点Done。3．插入Closed-loop喷嘴，完成后点Done。4．将鞘液桶的液流管和气管分别连接到酒精桶上，点Done。40FACSAriaⅡ中文操作手册鞘液桶酒精桶鞘液桶酒精桶气管液流管从此处断开连接液路关机时正常运

8、行时5．按照提示，放上一管3ml清洗液，完成后点Done；6．清洗完成后，按提示，点OK。7．关闭流式细胞仪主机电源；8．退出软件，关计算机。清洗外部用软布沾次氯酸钠和蒸馏水清洗