微生物检测技术 生物技术 刘文静

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1、《微生物检测技术》结课论文系别：生命科学学院班级：09生物技术姓名：刘文静学号：200940700058茵落总数检测技术研究进展摘要：茵落总数作为判定食品被污染程度标志，具有重要卫生学意义。该文详述茵落总数国家标准检测方法及近年来茵落总数快速检测方法进展，并对今后检测方向进行展望。关键词：茵落总数；细茵总数；细菌检测食品安全全球关注，已成为继人口、资源、环境之后第四大社会问题。食品中有害污染物，包括物理、化学、生物性污染物等，严重危及人类健康、生命安全，微乍物污染造成食源性疾病仍是世界食品安全中最突出

2、问题。食品检验微乍物部分主要包括食品中致病菌、菌落总数和大肠菌群检验。由于种种原因，对致病菌的检验到I：I前为止尚未列入常规检验指标，而是根据不同食品选定一定致病菌作为检验重点：而食品中菌落总数和大肠菌群数值则作为常用卫生指标。1菌落总数介绍　菌落是指细菌在固体培养基上生长繁殖而形成的能被肉眼识别的生长物，它是由数以万计相同的细菌集合而成。当样品被稀释到一定程度，与培养基混合，在一定培养条件下，每个能够生长繁殖的细菌细胞都可以在平板上形成一个可见的菌落。　　菌落总数就是指在一定条件下（如需氧情况、营养

3、条件、pH、培养温度和时间等）每克（每毫升）检样所生长出来的细菌菌落总数。按国家标准方法规定，即在需氧情况下，37℃培养48h，能在普通营养琼脂平板上生长的细菌菌落总数，所以厌氧或微需氧菌、有特殊营养要求的以及非嗜中温的细菌，由于现有条件不能满足其生理需求，故难以繁殖生长。因此菌落总数并不表示实际中的所有细菌总数，菌落总数并不能区分其中细菌的种类，所以有时被称为杂菌数，需氧菌数等。菌落总数测定是用来判定食品被细菌污染的程度及卫生质量，它反映食品在生产过程中是否符合卫生要求，以便对被检样品做出适当的卫生

4、学评价。菌落总数的多少在一定程度上标志着食品卫生质量的优劣。[1]2国家标准测定方法介绍[2]GB／T4789．2—2008规定两种测定方法，第一法为平板菌落计数法；第二法为菌落总数PetrifiIIllTM测试片法。平板菌落计数法要求严格，需要一定专业操作技能：吸管进出瓶子或试管时，吸管口不触及瓶口、管口外围部分；吸管插入试样液内深度不小于2．5cm，且管尖与容器内壁紧贴：进行稀释时，吸管口与稀释液不接触；制备10倍系列稀释样品匀液时，每递增稀释一次，换用一次lml无菌吸管或吸头：榆样从开始稀释到倾

5、注最后一个平皿所用时间不宜超过20min；到达规定培养时间，立即计数，否则应将平板放置于O～4℃，但不得超过24h。尤其注意：若空白对照平板出现菌落，则此次榆测结果无效；稀释倍数愈商菌落数愈少，稀释倍数愈低菌落数愈多，如出现逆反现象，不可作为检样计数报告依据。相比GB／T4789．2—2003，GB／T4789．2—2008增加第二法(菌落总数PetrifilmTM测试片法)。与第一法比较，第二法省去配制培养基、消毒和培养器皿清洗消毒、实验废弃物灭菌处置等大萤辅助性工作，劳动强度减轻、材料成本降低、操

6、作程序简化。两种测试法中规定：一般食品36℃±l℃培养48h±2h，水产品30℃±1℃培养72h±3h。但在实际情况中，有些食品如面包、蛋糕保存期仅两三天，有些食品如馒头、米饭等是当天生产当天销售完，基本没有库存，实时采集样品，采用园家标准测定方法获得检测结果意义有限。由此，快速检测技术应运而生，并由培养水平向分子水平迈进。3快速测定方法介绍3.1计数器测定法　即用血细胞计数器进行计数。取一定体积的样品细胞悬液置于血细胞计数器的计数室内，用显微镜观察计数。由于计数室的容积是一定的(0.1mm3)，因而

7、根据计数器刻度内的细菌数，可计算样品中的含菌数。本法简便易行，可立即得出结果。本法不仅适于细菌计数，也适用于酵母菌及霉菌孢子计数。　　3.2电子计数器计数法电子计数器的工作原理是测定小孔中液体的电阻变化，小孔仅能通过一个细胞，当一个细胞通过这个小孔时，电阻明显增加，形成一个脉冲，自动记录在电子记录装置上。该法测定结果较准确，但它只识别颗粒大小，而不能区分是否为细菌。因此，要求菌悬液中不含任何碎片。3.3阻抗法电阻抗法检测细菌总数是根据微生物生长代谢将培养基中蛋白质和碳水化台物转变为氨基酸及乳酸等，引起

8、培养基电阻抗微弱变化，通过仪器记录阻抗改变DT时间测定微生物存在及计数。阻抗法已被AOAC接受为首选方法，非常适于临床样本细菌检测、食品质量与病原体检测、工业生产中微生物过程控制及环境卫生细菌学。[3]易敏英[4]在不同时间随机抽取各牛奶厂鲜牛奶样品编号，以Bactometer仪检测150个不同细菌浓度鲜奶样DT值，进行阻抗测定，求取细菌总数。经近两年实践证明，检验周期大大缩短，保证对鲜牛奶卫生监控，且操作简便，结果准确可靠。顾其芳[5]采用微生物自动分