口服葡萄糖耐量试验

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1、口服葡萄糖耐量实验(OGTT)主讲：向梦甜PPT制作：向梦甜其他：汪琪、楚兵兵、杜龙付云实验目的与要求目的要求掌握酶法测定血清葡萄糖浓度的原理掌握血糖变化的临床生理意义掌握口服葡萄糖耐量试验的原理，适用人群和临床意义。口服葡萄糖耐量试验（OGTT）是一种葡萄糖负荷试验，用于检查人体胰岛素B细胞功能和机体对糖的调节能力。正常人进食后血糖都会暂时性升高，30-60分钟后可升到最高峰，但一般不超过8.9mmol/L，2小时左右又会回到空腹水平。这种现象称为耐糖现象。若内分泌失调或神经系统功能紊乱，则调

2、节功能失常，食入大量糖后血糖浓度可急剧上升，短时间不能恢复到原值，称为耐糖失常现象。所以观察耐糖现象可以了解调节血糖的各种机能是否健全。实验原理血糖的测定方法测定方法无机化学法有机化学法酶法无机化学法：Folin-Wu法，基于葡萄糖醛基的还原性Cu2+OH-Cu+Glu磷钼酸显色特异性差有机化学法：邻甲苯胺法、联苯胺法、氨基联苯法等邻甲苯胺+Glu葡萄糖基胺希夫氏碱蓝绿色化合物缩合脱水分子重排干扰因素多酶法：1、己糖激酶法（HK）2、葡萄糖氧化酶法（GOD法）血糖的测定方法１、己糖激酶法（ＨＫ法

3、）原理：葡萄糖＋ATPＨＫ　葡萄糖-６-磷酸＋ADP葡萄糖-6-磷酸＋NADP＋G-6-PD６-磷酸葡萄糖内酯+NADPHNADPH在340nm有吸收峰，其吸光度增加与标本中的葡萄糖浓度成正比评价：本法特异性高，灵敏度高，干扰因素少，适用于自动化分析，为葡萄糖测定的参考方法，但是试剂较贵。血糖的测定方法血糖的测定方法评价：操作简单，特异性较高，是血糖测定的首选方法．但溶血（血红蛋白）、四环素、尿酸、Vc、胆红素、GSH可引起测定结果负偏差。2、葡萄糖氧化酶法(GOD)葡萄糖＋O2+H2OGOD葡

4、萄糖酸内酯＋2Ｈ2O22Ｈ2O2+4-氨基安替比林+酚POD红色醌类化合物+Ｈ2O+O2血糖的测定方法总结血糖的测定方法按测定原理可分为无机化学方法、有机化学方法和生物化学方法三类。此外，还有固相酶法、电化学法及质谱法等。常用的是分光光度法和酶学方法。分光光度法中常见的是邻甲苯胺法，是利用葡萄糖在加热的有机酸溶液中与某些芳香族胺类，可生成有色衍生物这一原理建立的。酶学方法有葡萄糖氧化酶法、己糖激酶法和葡萄糖脱氢酶法等。临床上OGTT主要适用情况（1）无糖尿病症状，空腹血糖异常，或偶尔出现糖尿，或

5、有明显糖尿病家族史者（2）有糖尿病症状，血糖水平不够糖尿病诊断标准者（3）妊娠期或甲状腺功能亢进出现糖尿者（4）不明原因肾病与视网膜病者。实验器材：5mL移液管、50或100uL微量可调式移液器、721E分光光度计、1cm比色皿、37℃恒温水浴锅应用GOD-POD法测定血糖浓度来检测葡萄糖耐量应用GOD-POD法测定血糖浓度来检测葡萄糖耐量实验试剂：1、0.1mol/L磷酸盐缓冲液（pH=7.0）:称取无水磷酸氢二钠8.67g及无水磷酸二氢钾5.3g溶于蒸馏水800ml中，调pH7.0，定容至1

6、L。2、酶试剂:取过氧化物酶12000U，葡萄糖氧化酶1200U，4-氨基安替比林10mg，置4℃保存，可稳定存放3个月。3、酚溶液:称取重蒸馏酚100mg溶于蒸馏水100ml中，用棕色瓶贮存。4、酶酚混合试剂:将酶试剂及酚溶液等量混合，4℃可以存放1个月。应用GOD-POD法测定血糖浓度来检测葡萄糖耐量5、12mmol/L苯甲酸溶液：取苯甲酸1.4g，于800ml蒸馏水中加温助溶，冷却后加蒸馏水定容至1L。6、葡萄糖标准贮存液（100mmol/L）：称取已干燥恒重的无水葡萄糖1.802g，溶于

7、约70ml12mmol/L苯甲酸溶液中，以12mmol/L苯甲酸溶液定容至100ml。2h后方可使用。（防止氧化的作用，葡萄糖为单糖，含醛基，易氧化成羧基，加入苯甲酸，平衡向左移动）7、葡萄糖标准工作液（5mmol/L）：吸取葡萄糖标准贮存液5.00ml放于100ml容量瓶中，用12mmol/L苯甲酸溶液稀释至刻度，混匀。实验步骤受试者前三天正常饮食，停用影响血糖的各种药物，如胰岛素、肾上腺皮质素、儿茶酚胺等。试验前1天晚餐后即不再进食（即空腹10~14小时）。次日清晨空腹抽静脉血2ml（称为空

8、腹血浆血糖，即FPG），然后将75g葡萄糖溶于200~300ml温开水中（儿童按每千克体重1.75g），令受试者5min内服下。服后半小时、1小时、2小时、3小时各抽一次血，取七支试管按下表操作：试管试剂实验步骤空白管（B）标准管（S）测定管（T0）测定管（T1）测定管（T2）测定管（T3）测定管（T4）血清（ml）————0.0200.0200.0200.0200.020葡萄糖标准液（ml）——0.020——————————蒸馏水（ml）0.020————————————酶酚混合试剂（ml）3