dads对人鼻咽癌cne2细胞周期阻滞及组蛋白乙酰化的研究

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1、南华大学硕士学位论文DADS对人鼻咽癌CNE2细胞周期阻滞及组蛋白乙酰化的研究姓名：贺修培申请学位级别：硕士专业：病理学与病理生理学指导教师：苏琦20070401原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得南华大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名日期：年月日关于学位论文使用授权说明本人同意南华大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位

2、论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保留学位论文；学校可根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文。作者签名：导师签名：1日期：2007年5月24日DADS对人鼻咽癌细胞系CNE2周期阻滞及组蛋白乙酰化的研究硕士研究生：贺修培导摘师：苏琦教授要目的：在前期工作的检测上，进一步探讨二烯丙基二硫(diallyldisulfide,DADS)对人鼻咽癌CNE2细胞周期的阻滞作用，并研究组蛋白乙酰化状态及其调控p21WAF1蛋白表达改变的情况。方法：MTT实验、细胞计数法观察不同浓度和作用时间DADS对CNE2细胞的生

3、长抑制作用；HE染色观察不同浓度和作用时间DADS对体外培养的CNE2细胞形态的影响；流式细胞术分析不同浓度和作用时间DADS对CNE2细胞的周期分布；免疫印迹分析不同浓度DADS诱导CNE2细胞组蛋白H3和H4乙酰化及周期相关蛋白P21WAF1表达变化。结果：MTT比色法检测显示，DADS能明显抑制CNE2细胞增殖，呈浓度和时间依赖性，90µmol/L，140µmol/L，240µmol/L和400µmol/LDADS处理48h后，对CNE2细胞增殖的抑制率分别为3.33%、12.90%、28.38%和56.90%,与对照组相比，差异有显著性意义(P<0.05)。细胞

4、计数结果表明，常规培养的CNE2细胞群体倍增时间为24.51h，当DADS的浓度由90µmol/L增加到400µmol/L时，其细胞群体倍增时间由27.68h延长到93.10h，与对照组比较，差异有显著性意义(P<0.05)。细胞形态学观察显示：90µmol/L，140µmol/L，240µmol/L和400µmol/LDADS处理细胞48后，与对照组细胞相比，异型性明显减少，核浆比例明显减小。流式细胞仪分析结果提示：DADS呈浓度依赖性将CNE2细胞阻滞在G0/G1期。Westernblot分析，不同浓度的DADS处理CNE2细胞48h后，组蛋白H3乙酰化的表达均较对

5、照组有增加，伴有药物浓度依赖性，90、140、240和400µmol/L处理分别比NS对照组增加20%、32%、42%和30%，差异有显著性（P<0.05）；与SB对照组比较时，除240µmol/LDADS处理组外，其余组均有差异显著（P<0.05）。同期实验发现，组蛋白H4乙4酰化程度较对照组差异无显著性；p21WAF1蛋白表达量随着DADS浓度升高而上升。结论：1.DADS对CNE2细胞有抑制增殖作用，呈剂量依赖效应。2.DADS对CNE2细胞的抑制增殖的机制，与组蛋白H3乙酰化水平提高，P21WAF表达上调，将细胞阻滞在G0/G1期有关。3.DADS可能是一种潜在

6、的组蛋白去乙酰化酶抑制剂。关键词：二烯丙基二硫；鼻咽癌；CNE2细胞；组蛋白乙酰化5ArresteffectofdiallyldisulfideoncellcycleinhumannasopharyngealcarcinomacelllineCNE2AbstractObjective:Toinvestigatethearresteffectofdiallyldisulfide(DADS)inthecellcycleofhumannasopharyngealcarcinomaCNE2celllineanditsmolecularmechanism.Methods:Theg

7、rowthinhibitioneffectofDADSonCNE2celllinewasmeasuredbyMTTassayandcellcounting.LightmicroscopewasemployedtoobservethemorphlogicalchangeafterDADStreatment.Phasedistributionofcellcyclewasanalyzedbyflowcytometry.ExpressionofH3,H4andP21WAF1weredeterminedbywesternblottinganalys