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1、HK基因综述许秀竹2009.11.13*1为了了解HK基因目前的研究状况和HK基因研究的主要方法，下面介绍目前国内外对于HK基因的研究情况。所有的工作主要集中在三个方面：HK基因的检测，HK基因的功能和性质还有HK基因的主要应用。现在对目前已有研究工作做一个总体介绍。*2聚合酶链反应(PolymeraseChainReaction,PCR)技术介绍：是80年代中期发展起来的体外核酸扩增技术。它具有特异、敏感、产率高、快速、简便、重复性好、易自动化等突出优点；能在一个试管内将所要研究的目的基因或某一DNA片段于数小时内扩
2、增至十万乃至百万倍,使肉眼能直接观察和判断；可从一根毛发、一滴血、甚至一个细胞中扩增出足量的DNA供分析研究和检测鉴定。过去几天几星期才能做到的事情，用PCR几小时便可完成。PCR技术是生物医学领域中的一项革命性创举和里程碑。*3RT—PCR（ReversedTranscriptPCR）是一种将cDNA合成与PCR技术结合分析基因表达的快速灵敏的方法，主要用于对表达信息进行检测或定量分析,还可以用来检测基因表达差异而不必构建cDNA文库克隆cDNA。*4一、检测方法的介绍：1.对于靶基因表达数据的内部标准化，标准的基因
3、表达的稳定性是一个基本的先决条件，但是许多所谓的假设稳定表达的看家基因（HKG）在某些实验条件下是不稳定的。文中，利用besetkeepr软件，在10个候选基因中结合它们的指数确定了最合适的标准。（指数是由另外的10个靶基因的比较来确定的。）Determinationofstablehousekeepinggenes,differentiallyregulatedtargetgenesandsampleintegrity:BestKeeper–Excel-basedtoolusingpair-wisecorrelati
4、ons.MichaelW.Pfaffl∗,AlesTichopad,ChristianPrgomet&TanjaP.Neuvians（2003）*52.使用实时反转录PCR（RT-PCR）技术评估来自健康个体和结核病患者的周围单核血细胞和全血中的13个HK基因的表达水平。通常使用的HK基因没有任何一个可以作为合适的内部参，因为它们的变化很大（>34倍最大变化）对于人类肺结核病的标准化mRNA水平，RNA特定的人类酸性核糖体蛋白是最稳定的HK基因。Validationofhousekeepinggenesfornorma
5、lizingRNAexpressioninreal-timePCR。KeertanDheda1,JimF.Huggett1,StephenA.Bustin2,MargaretA.Johnson1,GrahamRook1,andAlimuddinZumla1（2004）*63.使用DNA微阵列技术，在前列腺癌和结肠癌基因模型系统中某些HKG的表达水平能检测到变化。对于在相似类型的癌症，化疗反应，确定疾病标志的分类变化，微阵列技术和定量PCR的高通量差异表达分析是一个共同的平台。Housekeepinggenesincan
6、cer:normalizationofarraydata。AnisH.Khimani1,AbnerM.Mhashilkar2,AlvydasMikulskis1,MichaelO’Malley1,JenniferLiao2,EvaE.Golenko1,PatMayer1,SunilChada2,JeffreyB.Killian1,andStevenT.Lott1（2005）*74.植物应激研究越来越多的基于基因表达。对于低丰度mRNA的检测，实时RT-PCR技术是目前最灵敏的技术。为了避免偏差，实时RT-PCR用到一个
7、或几个内部控制基因，他们在治疗期间没有波动，在生物和非生物应激期间用geNorm软件在马铃薯类植物中检测到的七个非调控的HKG。三个实验条件的结果表明：在测试的7个基因中，ef1α是最稳定的。其它HKG的表达根据不同应激各不相同。Housekeepinggeneselectionforreal-timeRT-PCRnormalizationinpotatoduringbioticandabioticstress.NathalieNicot,Jean-FrancxoisHausman,LucienHoffmannandD
8、anie`leEvers*（2005）*85.使用统计分析来检查一个很大的人类微阵列数据库，寻找在各种组织，疾病状态和细胞系中稳定表达的基因。进一步选择在不同水平表达的基因，以便达到可靠地定量结果。实时RT-PCR技术增加的三个新发现的参考基因（CGI-119,CTBP1，GOLGAl），另外，三个已知的HKG（B2M,GAPD,
