动物细胞融合与单克隆抗体讲

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1、2.2动物细胞工程2.2.2动物细胞融合与单克隆抗体植物细胞A植物细胞B去掉细胞壁去掉细胞壁原生质体A原生质体B原生质体融合杂合的原生质体再生出细胞壁杂种细胞细胞分裂分化发育愈伤组织杂种植株温故知新:植物体细胞杂交过程材料1:1970年，有两位科学家做了一个人—鼠细胞融合的实验，以证明细胞膜的流动性。那么，如何实现人—鼠细胞的融合，动物细胞融合后还有什么用途呢？人-鼠(想像图)一、动物细胞融合1.概念：动物细胞融合（cellfusion）也成细胞杂交，是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。融合和形成的具有原来两个

2、或多个细胞遗传物质的单核细胞，称为杂交细胞。2、原理：细胞膜的流动性3.融合过程：诱导融合的方法？诱导方法：物理方法：化学法：生物法：灭活的病毒电激等聚乙二醇（PEG)为什么灭活的病毒能作诱导剂？3.融合过程：灭活病毒诱导细胞融合的原理：病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞膜上的糖蛋白发生作用，使细胞互相凝聚，细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合。灭活是指用物理或化学手段使病毒或细菌失去感染能力，但并不破坏这些病原体的抗原结构。P52生物技术资料卡植物细胞杂交与动物细胞融合的比较比较项目植物

3、体细胞杂交动物细胞融合原理融合前处理使用的酶诱导方法主要用途细胞膜的流动性细胞的全能性细胞膜的流动性纤维素酶、果胶酶胰蛋白酶物理方法（离心、振荡、电激）化学方法（PEG）物理、化学方法灭活的病毒获得杂种植株制备单克隆抗体去除细胞壁后诱导原生质体融合使细胞分散后诱导细胞融合4.意义：突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交（种间、属间、科间、动植物之间）成为可能。5.应用：最重要的用途是制备单克隆抗体动物细胞融合物理法：化学法：生物法：诱导融合的方法原理：细胞膜的流动性过程：离心、震动、电激聚乙二醇（PEG)灭活的病毒动、植物

4、细胞融合的主要区别用途：最重要的用途是制备单克隆抗体思考？1.抗体由何种细胞产生？如何产生？2.抗体的化学本质是什么？与抗原作用的特点？主要分布在哪里？3.用传统的方法如何获得抗体？(三)单克隆抗体思考？1.抗体由何种细胞产生？如何产生？2.抗体的化学本质是什么？与抗原作用的特点？主要分布在哪里？3.用传统的方法如何获得抗体？(三)单克隆抗体抗体的传统生产方法从血清中分离抗体该法制备抗体的特点：产量低、纯度低，且抗体的特异性差、灵敏度低。多种效应B细胞动物体内多种抗体抗原单克隆抗体的制备单克隆抗体:单个细胞克隆产生的化学

5、性质单一特异性强的抗体利用效应B细胞产生抗体的功能利用肿瘤细胞无限增殖的特性利用细胞融合的技术将两种细胞融合获得杂交瘤细胞利用动物细胞培养技术大量培养杂交瘤细胞设计方案：1、过程注射抗原已免疫的B淋巴细胞骨髓瘤细胞细胞融合、筛选杂交瘤细胞细胞培养筛选，继续培养足够数量的、能产生特定抗体的细胞群体外培养注射到小鼠腹腔单克隆抗体单克隆抗体的制备骨髓瘤细胞免疫小鼠单克隆抗体筛选克隆、筛选体内培养体外培养B淋巴细胞（选择培养基）（抗体检测）细胞融合杂交细胞1、（只考虑两两融合）融合细胞几种类型？2、本过程中进行了两次筛选，目的分

6、别是什么？第1次筛选要淘汰哪些细胞？3、杂交瘤细胞有何特点？4、本过程利用的哪些技术？思考以下问题：2、单克隆抗体的优点特异性强、灵敏度高3、单克隆抗体的应用（1）作为诊断试剂——最广泛应用准确、高效、简易、快速（如同位素标记单克隆抗体，可诊断肿瘤、心血管畸形等）（2）运载药物生物导弹=单克隆抗体+药物，治疗肿瘤）(“生物导弹”—单抗导向，药物为弹头)看书上53页图，分组讨论，单抗制备过程分哪几步？请用箭头把以下代表单克隆抗体制备过程步骤的图解的字母按正确顺序连接起来。顺序是？有梦想，才会有创造！已成功的动物细胞融合实例

7、有很多，如人—小鼠、人—兔、人—鸡、鼠—兔、鸡—鼠等上百种融合细胞。甚至已成功完成了酵母菌—鸡、人—胡萝卜等细胞的融合。想了解更多信息，可通过网络、电视、杂志等途径关注细胞融合和单克隆抗体的最新信息。生物种间杂交想像图1、科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是（）A.经过免疫的B淋巴细胞B.没经过免疫的T淋巴细胞C.经过免疫的T淋巴细胞D.没经过免疫的Ｂ淋巴细胞A巩固练习2.动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较中，正确的是（）诱导融合的方法完全相同B.所用的技

8、术手段基本相同C.操作步骤基本相同D.都能形成杂种细胞D3.单克隆抗体制备过程中培育的杂交细胞是（）A.由小鼠能产生抗体的B淋巴细胞与肝细胞融合B.由小鼠一个B淋巴细胞诱导融合而成C.由小鼠一个B淋巴细胞与肌瘤细胞诱导融合而成D.由小鼠一个B淋巴细胞与骨髓瘤细胞诱导融合而成D4.只能使动物细胞融合的常用诱导方法是（