脂肪鉴定 脂类细胞化学(苏丹Ⅲ染色法) 实验报告

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1、细胞生物学实验报告脂类细胞化学（苏丹Ⅲ染色法）1.实验目的：用苏丹Ⅲ染液对小鼠的肠系膜细胞染色，观察细胞颜色，掌握苏丹Ⅲ染液的染色方法。2.实验用品：（1）仪器及器材：显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、手术剪、解剖盘、胶头滴管（2）实验药品：蒸馏水、甲醛钙溶液、70%乙醇水溶液、苏丹Ⅲ染液（3）实验材料：小鼠3.实验原理：（1）由脂肪酸和醇作用生成的酯及其衍生物统称为脂类，这是一类一般不溶于水而溶于脂溶性溶剂的化合物。脂类是机体内的一类有机大分子物质，它包括范围很广，大体上可以分为类脂和油脂两大类。类脂包括磷脂(phospholipids)，糖脂(glycol

2、ipid)和胆固醇及其酯(cholesterolandcholesterolester)三类。而油脂可以分为常温下常温液态的油和常温下固态的脂肪两类。这几种脂类化学结构有很大差异，生理功能各不相同。其共同物理性质是不溶于水而溶于有机溶剂，在水中可相互聚集形成内部疏水的聚集体。（2）在固定细胞时，通常使用脂溶性固定液。然而，鉴定的材料是脂肪时，脂溶性的固定液会溶解脂肪，致使把切片放到显微镜下观察时，观察不到被染色的脂肪，只能看到脂肪细胞中有很大的空洞。最好的固定材料是甲醛类的固定液。如医学上保存尸体采用的是福尔马林，即40%的甲醛水溶液，本次实验采用的则是甲

3、醛钙溶液。（3）光学显微镜的切片多是石蜡切片。在熔接石蜡时，需要用到脂溶性溶剂，而脂溶性溶剂会溶解细胞中的脂肪，因此本次实验不可采用石蜡切片。但是锇酸固定的脂肪不溶于无水乙醇、二甲苯等有机溶剂，可以采用石蜡切片。（4）制作切片有多种方法，如冰冻切片、明胶包埋冰冻切片、本次实验采用的是操作简单的铺片法。（5）脂类染色的原理是，染料溶于脂类显色。选择溶剂时应注意，溶剂必须既溶解的染料，又不溶解掉脂类。4.实验步骤：（1）用断头法处死小鼠，置于解剖盘中。剪开腹腔，用镊子提起小肠，使盖玻片紧贴于肠系膜。用剪子将连同盖玻片和其上粘的肠系膜剪下，反扣于已滴加甲醛钙的载

4、玻片上，固定15分钟,（2）吸蒸馏水滴于载玻片、载玻片之间冲洗，用滴管不断吸取液体以去除固定液。（3）用70%的乙醇水溶液代替蒸馏水重复上一步骤，进行冲洗。（4）用苏丹Ⅲ染液染色30mins。（1）染色结束时，用吸水纸吸去多余染液。擦净盖玻片周边及表面，用显微镜观察。2.实验结果：脂肪细胞被苏丹Ⅲ染液染成橘红色。细胞周围有溢出的脂肪粒，呈圆形，橘红色。10*4显微镜下观察：10*10显微镜下观察：10*40显微镜下观察：1.分析与讨论（1）结果分析：脂肪细胞中含有大量脂肪，脂肪被苏丹Ⅲ染液染成橘红色，因而使整个细胞呈现橘红色。某些脂肪细胞破裂，而使脂肪溢出

5、，呈橘红色的圆球状。（2）注意事项①在用盖玻片贴肠系膜：由于小鼠的肠系膜很小，因而应该提前缩小盖玻片的尺寸。可以用剪刀剪或用手掰小，并尽量使最后的盖玻片呈正方形。②肠系膜的选择：肠系膜是一层包裹在小肠外的很细的薄膜，这层膜的大部分地方是没有脂肪细胞的。但是，肠系膜血管的周围有一些起保护作用的脂肪细胞。因此，选材时应注意选择含有血管的肠系膜。但是有一些血管周围的脂肪细胞非常厚，肉眼可见呈白色。这样的地方是无法观察的，所以选材时还要注意材料的透明度。③染色：染色过程为30mins，在这一过程中，染料中的水分很有可能蒸发，因此在染色过程中应不时向载玻片中滴加染料

6、。④观察：在把物镜由10倍转为40倍时，应考虑到物镜变长，可能会使镜面蹭到小鼠的小肠。在观察时可先将小肠切除，只观察肠系膜。⑤观察：观察时如果血管呈红色，是由于放血时没有放干净，下次实验应该注意（3）作业：糖类的鉴定Molisch反应（α-萘酚反应）：此方法是鉴定糖类最常用的颜色反应。它的原理是：糖类在浓酸作用下所形成的糠醛及其衍生物可以与α-萘酚作用，形成红紫色复合物。由于在糖溶液与浓硫酸两液面间出现红紫色的环，因此又称紫环反应。α-萘酚也可用麝香草酚或其他的苯酚化合物代替，麝香草酚溶液比较稳定，其灵敏度与α-萘酚一样。除了糖类之外，各种糠醛衍生物、葡萄

7、糖醛酸、丙酮、甲酸、乳酸等都可以呈现近似的阳性反应。因此，阴性反应证明没有糖类物质的存在；而阳性反应只能说明有糖类存在的可能。此反应不能鉴别多聚糖如淀粉，纤维素等。Benedict反应：班氏试剂是斐林试剂的改良（也是含有Cu2+的碱性溶液），能使具有自由醛基或酮基的糖类氧化，其本身则变成砖红色或黄色的Cu2O，可用来测定还原糖的存在。它利用柠檬酸作为Cu2+的络合剂，其碱性比斐林试剂弱，灵敏度高，干扰因素少，因而在实际应用中有更多的优点。Bial反应（甲基间苯二酚反应）：戊糖与浓盐酸加热形成糠醛，在有Fe3+存在的条件下，它与甲基间苯二酚（地衣酚）缩合，形

8、成深蓝色的沉淀物（此沉淀物溶于正丁醇）。己糖也能发生反应，产生灰绿