临床检测--谷丙转氨酶活性的测定

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1、血清丙氨酸氨基转移酶活性测定（改良赖氏法）三峡大学医学院生物化学教研室临床指标的检测1.掌握血清丙氨酸氨基转移酶活性测定的基本原理。2.熟悉血清丙氨酸氨基转移酶活性测定的具体操作方法。3.了解血清丙氨酸氨基转移酶活性测定的临床意义。【目的要求】临床意义谷丙转氨酶(GlutamicpyruvicTransaminase，GPT)丙氨酸氨基转移酶(AlanineTransaminase，ALT)ALT(GPT)广泛存在于机体各种组织中，但在肝细胞中含量最多，当肝脏有病变，特别是急性肝炎及肝细胞坏死，血清中谷丙转氨酶活性显著升高。在肝癌、肝硬变以及胆道疾

2、病时，此酶活性也可中度或轻度增高。如何测定酶的活性?活性单位定义中必须规定哪些条件?在紫外分光光度计中，1ml血清(反应溶液总量为3ml)在340nm波长下，用内径为1.0cm的比色皿，在25℃，1分钟内生成的丙酮酸，在乳酸氢酶催化下，使NADH+H+变成NAD+，使光密度下降0.001为1个转氨酶活性单位。卡门氏单位的定义为：丙氨酸+α-酮戊二酸谷氨酸+丙酮酸GPT乳酸氢酶NAD++乳酸NADH+H+丙氨酸+α-酮戊二酸谷氨酸+丙酮酸GPT乳酸氢酶NAD++乳酸NADH+H+改良赖氏法显色反应分光光度法赖氏法没有制定自身的单位定义，而是以实验数据套

3、用卡门氏单位作表示的。血清中的谷-丙转氨酶（ALT），在37℃、pH7.4的条件下，可催化基质（底物）液中的丙氨酸与α-酮戊二酸生成谷氨酸和丙酮酸：【实验原理】012345丙酮酸标准液(ml)0.000.050.100.150.200.25ALT底物试剂(ml)0.500.450.400.350.300.250.1M磷酸盐缓冲液pH7.4(ml)0.100.100.100.100.100.10相当于GPT活性(卡门氏单位)0.0028579715020037℃水浴预温5分钟，各管加2,4-二硝基苯肼0.5ml混匀，再在37℃水浴中放置20分钟后，各管

4、加0.4mol/LNaOH溶液5ml，混匀放置10分钟后，以蒸馏水调零点，用520nm波长比色，读取各管光密。.各管的读数均减去对照管(O管)的光密度，然后以光密度值为纵坐标，各管相应的转氨酶活性单位为横坐标，绘制标准曲线。实验操作1.标准曲线的制作:TC血清(ml)0.1—ALT底物液(ml)0.50.5混匀后，置37℃水浴中保温30分钟2，4-二硝基苯肼液(ml)0.50.5混匀后，置37℃水浴中保温30分钟血清(ml)—0.10.4mol/LNaOH(ml)5.05.02.酶活性测定：测定前将底物缓冲液在37℃水浴中预温5分钟，再按下表操作。混

5、匀，在室温中放置10分钟，以蒸馏水调零点，用520nm波长比色，读取光密度。用T-C管的光密度查标准曲线，即得到待测血清中所含ALT的酶活性。参考值：5~25卡门氏单位【临床意义】肝细胞中含ALT最丰富，因此当肝脏疾病致肝细胞受损伤时，ALT即大量释放入血液，致使血清中ALT活性增高。测定ALT是检查肝功能的重要指标之一。ALT显著增高见于各种急性肝炎及药物中毒性肝细胞坏死，中等程度增高见于肝癌、肝硬化、慢性肝炎及心肌梗塞，轻度增高则见于阻塞性黄疸及胆道炎等疾病。骨骼肌损伤、多发性肌炎亦可引起转氨酶活性升高。【思考题】1.血清中谷丙转氨酶的测定有何临

6、床意义？2.血清谷丙转氨酶的测定有何注意点？为什么要避免溶血？