生物实验报告-ABO血型鉴定

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1、生物实验报告姓名：班级：日期：同组者：实验序号：实验题目：ABO血型鉴定实验目的：1.掌握血涂片的制作，了解各种血细胞的结构特点2.掌握ABO血型的鉴定方法实验原理：人类的ABO血型遗传是由基因决定的。很多時间，一个基因只包含两个等位基因。但是，控制血型的基因I则有三个不同等位基因。即同一时间内，一个位点可以有其中任何两个等位基因出现。等位基因A使红血球产生抗原A；等位基因B使红血球产生抗原B；等位基因O使红血球不产生抗原；等位基因A和B为等显性，O对A和B均为隐性。ＡＢＯ血型鉴定的原理是根据红细胞上有或无Ａ抗原和Ｂ抗原或AB抗原，将血型分为Ａ型、Ｂ型、ＡＢ型及Ｏ型四

2、种。本实验采用红细胞凝集试验，用已知抗Ａ和抗Ｂ单克隆抗体来测定红细胞上有无相应的Ａ抗原或Ｂ抗原或AB抗原来确定ABO血型。抗原抗体反应——在ABO血型系统中，红细胞膜上抗原分A和B两种抗原，而血清抗体分抗A和抗B两种抗体。A抗原加抗A单克隆抗体或B抗原加抗B单克隆抗体，则产生凝集现象→从而测知受试者红细胞膜上有无A或/和B抗原→判断血型抗体在相邻的红细胞表面抗原决定簇之间搭桥形成肉眼可见的颗粒状凝集团块.实验对象：血液实验器材：受检者血液抗A、抗B单克隆抗体载玻片、脱脂棉、针、酒精棉球、生物显微镜、冰箱等。实验方法及步骤：1.血涂片的制作n用酒精棉球擦拭消毒指尖，用采

3、血针刺破指尖或耳垂，从采血针眼处挤出绿豆大小血滴，用清洁玻片面的一端轻轻接触血滴，使血滴附于玻片面上（注意勿触及皮肤，否则血在玻片上就不能成滴）。n以左手拿该片的两端，迅速用右手拿住另一载玻片的一端，在左手载玻片上由前向后接触血滴，使两载玻片约成45°角，轻轻移动，使血滴成一直线，然后由前向后推为一均匀的薄片。n涂片在空气中干燥后置于染色架上，滴加瑞氏染色液，使涂片被染色液覆盖。n染1分钟后，再加等量的缓冲液于染色液上，浸染约5-8分钟此时涂片表面呈现一层古铜色。n用蒸馏水迅速冲洗，见涂片呈粉红色后，自然晾干。2.血细胞观察制作良好的血涂片厚薄适宜，血膜分布均匀，呈粉

4、红色。选一厚薄适宜部位置显微镜下观察。先用低倍镜观察全片，了解涂片染色、细胞分布情况，再用高倍镜观察。n红细胞数量最多，体积小而圆、均匀分布，呈红色的圆盘状，边缘厚，着色较深，中央薄，着色较浅，无细胞核、细胞器，胞质内充满血红蛋白。n白细胞白细胞数量较红细胞数量少，但胞体大，细胞核明显，极易与红细胞区别开。n嗜中性粒细胞是白细胞中较多的一种，约占白细胞总数50-70%。体积比红细胞大，主要的特征是胞质中的特殊颗粒细小，分布均匀，着淡紫红色。胞核着深紫红色，一般分3—5叶，叶间以染色质丝相连。核分叶的多少与该细胞年龄有关，如核为杆状，则为嗜中性粒细胞的幼稚型。n嗜酸性粒

5、细胞比中性粒细胞略大，数量少，约占7%以下。核常分两叶，着紫蓝色。主要特点是胞质内充满粗大、圆形的颗粒，色鲜红或桔红。n嗜碱性粒细胞数量很少，约占1%以下。在一般血涂片上不易找到，体积比上述2种白细胞稍小。胞质中分散着许多大小不一的深紫蓝色颗粒。胞核形状不定,圆形或分叶，也染成紫色，但染色略浅，一般都被颗粒遮盖，形状不清n淋巴细胞数量较多，约占20%-40%，可见中、小型，淋巴细胞。其中小淋巴细胞最多,略大于红细胞。核大而圆,几乎占据整个细胞，染成深蓝紫色。胞质极少，仅在核的一侧出现一线状天蓝色或淡蓝色的胞质。中淋巴细胞比红细胞大，胞质较小淋巴细胞的稍多，着色较浅。核

6、圆形或卵圆形，位于细胞中部，也染成深蓝紫色。n单核细胞数量少，约占2%-8%，是细胞中体积最大的一种，胞核呈肾形、马蹄形，常在细胞一侧，着色比淋巴细胞浅。n血小板为形状不规则的细胞小体，其周围部分为浅蓝色，中央有细小的紫色颗粒，常聚集成群，分布于红细胞之间。高倍镜下一般只能看到成堆的紫色颗粒，在油镜下才能看到颗粒周围的浅色胞质部分。3.血型鉴定n标记凹载玻片：左上角写A，右上角写B。n分别吸取抗A、抗B单克隆抗体各1滴滴于双凹载玻片左端和右端。n采血针刺破左手无名指尖或耳垂，待血液出来后，用2支毛细滴管吸取或消毒后的牙签挑取血液，分别加入到玻片左、右两侧的单克隆抗体试

7、剂内，并用牙签搅拌，使单克隆抗体试剂与血液混匀。（切勿混用毛细滴管和牙签！）然后置室温下5min后观察结果。n肉眼观察：如果外观略呈花边状或锯齿状，看上去有沉淀，则多为凝集；如果血滴呈均匀状态，边缘整齐，则多为不凝集。n进一步在低倍镜下观察：在低倍镜下，如果观察到红细胞凝集成团，或尚有少数游离细胞，则为凝集现象；如果红细胞均为游离状态，则为不凝集。根据镜下所见有无凝集现象判定血型。n判断血型根据被试者红细胞是否被A，B型标准血清所凝集，判断其血型。注意事项：玻片、试管都要标记！！！，A及B标准血清/抗A、抗B单克隆抗体绝对不能相混,不要依靠用染料颜色