《鼠单抗的改造》PPT课件

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1、1鼠单抗的改造2本章主要内容概述C区的人源化--嵌合抗体V区的人源化--改型抗体小分子抗体3概述鼠源性单抗在临床应用中存在的问题具免疫原性激发免疫应答，消弱疗效，产生副作用与FC片段相关的功能不能有效活化如活化补体，ADCC,调理作用半衰期短4概述鼠源性单抗的改造原则保持原来抗体的特异性与亲和力；尽量减小其免疫原性。发展阶段C区的人源化--嵌合抗体鼠抗V区与人抗C区组装而成V区的人源化改型抗体小分子抗体5C区的人源化--嵌合抗体1984Morrison首次报道依据90%的人抗鼠抗体反应针对鼠抗C区基本手段从杂交瘤中获得鼠抗V区基因从人B细胞获得人抗C区基因将二者克隆到表达

2、载体转染哺乳动物细胞，进行表达6C区的人源化--嵌合抗体主要形式嵌合IgG嵌合Fab嵌合F(ab’)27C区的人源化--嵌合抗体嵌合IgG目前构建的大多数嵌合抗体均为鼠-人IgG如何构建？鼠抗基因人抗基因VLCLVHCH1CH2CH3VLCLVHCH1CH2CH3VHCH1CH2CH3VLCL8C区的人源化--嵌合抗体嵌合IgG目前构建的大多数嵌合抗体均为鼠-人IgG抗体基因的克隆鼠抗V区基因的获得RT-PCR方法引物设计：依据VH和VL的组成--由4个相对保守的FR和3个CDR，设计（注意酶切位点）。9C区的人源化--嵌合抗体嵌合IgG目前构建的大多数嵌合抗体均为鼠-人

3、IgG抗体基因的克隆鼠抗V区基因的获得提取mRNA：从杂交瘤或脾细胞中获得RT-PCR法克隆VH和VL基因10C区的人源化--嵌合抗体嵌合IgG目前构建的大多数嵌合抗体均为鼠-人IgG抗体基因的克隆人抗C区基因的获得C区的选择：依据目的不同选择C区—即抗体亚型，如补体活化能力，ADCC等IgG1的补体活化及ADCC作用强于IgG3，而IgG4没有或很弱。与Fc受体结合力IgG1和IgG3最强IgG1和IgG4半衰期较长11C区的人源化--嵌合抗体嵌合IgG目前构建的大多数嵌合抗体均为鼠-人IgG抗体基因的克隆人抗C区基因的获得引物设计：C区基因，设计时注意酶切位点提取mR

4、NA：从B细胞中获得RT-PCR法克隆C区基因12C区的人源化--嵌合抗体嵌合IgG目前构建的大多数嵌合抗体均为鼠-人IgG表达载体的构建构建嵌合L链与H链的重组质粒注意必须是真核表达载体13C区的人源化--嵌合抗体嵌合IgG目前构建的大多数嵌合抗体均为鼠-人IgG嵌合抗体的表达转染哺乳动物细胞进行表达哺乳动物细胞的选择：骨髓瘤细胞，COS细胞，CHO细胞等。14几种常用宿主细胞的表达特点COS细胞短暂表达较为理想，几天内即可装配成功骨髓瘤细胞最主要的宿主细胞，如NS0CHO细胞常用宿主细胞，300-900mg/L15嵌合IgG优点与不足优点保留了鼠抗的特异性与亲和力基本

5、解决鼠抗免疫原性所致的不良反应能有效激活补体及ADCC延长半衰期改善药代动力学特性16已批准上市的治疗性单抗2001淋巴瘤CD52人源化抗体Campath2000淋巴瘤CD33人源化抗体Mylotarg1998RSV感染RSVF蛋白人源化抗体Synagis1998乳腺癌HER-2人源化抗体Herceptin19981999炎症性肠病类风湿关节炎TNF-α人-鼠嵌合抗体Remicade1998移植排斥CD25人-鼠嵌合抗体Simulect1997淋巴瘤CD20人-鼠嵌合抗体Rituxan1997移植排斥CD25人源化抗体Zenapax1994冠心病血小板人-鼠嵌合FabRe

6、oPro1995大肠癌17-1A鼠单抗Panorex1986移植排斥CD3鼠单抗OKT3批准日期适应症靶向抗原抗体种类抗体名称17嵌合IgG优点与不足不足仍具一定抗原性分子量较大，组织穿透能力较差清除较慢在导向诊断与治疗方面受限18C区的人源化--嵌合抗体Fab和F(ab’)2嵌合抗体Fab克隆鼠抗V区基因克隆人抗CH1和Cκ基因重组构建表达载体转染宿主细胞，表达嵌合抗体1920C区的人源化--嵌合抗体Fab和F(ab’)2嵌合抗体F(ab’)2化学偶联法通过化学试剂将Fab连接成一个双价抗体分子重组末端修饰法在Fab的C端额外连接一个Cys残基：效率较低连接（CPP）3

7、，效率可达70%21C区的人源化--嵌合抗体Fab和F(ab’)2嵌合抗体优点可原核表达包涵体：高效，可达30%，复性难分泌表达：周质腔，可溶有活性，避免降解，降低毒性成功范例：抗CD3的Fab700mg/L人源化抗体HuMab4125-8Fab’2g/L22C区的人源化--嵌合抗体Fab和F(ab’)2嵌合抗体优点可原核表达良好的药物载体血液清除率高导向诊断与治疗23C区的人源化--嵌合抗体Fab和F(ab’)2嵌合抗体缺点无ADCC,CDC滞留时间短仍具一定抗原性24V区的人源化嵌合抗体不能完全解决抗原性问题V区的人源化—