消毒与灭菌效果的评价方法与标准.

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1、消毒与灭菌效果的评价方法与标准　第一篇　压力蒸汽灭菌效果评价方法与标准　　1　主题内容与适用范围　　本方法规定了压力蒸汽灭菌技术标准及其评价灭菌效果的检测方法。　　本方法适用于对压力蒸汽灭菌设备灭菌效果的评价。　　2　试剂　　本标准所用试剂，凡未说明规格者，均为分析纯（AR），水为蒸馏水。　　2．1　蛋白胨。　　2．2　葡萄糖。　　2．3　溴甲酚紫酒精溶液：取溴甲酚紫2．0g，溶于100mL95％乙醇中。　　2．4　溴甲酚紫蛋白胨水培养基配制：蛋白胨10．0g，葡萄糖5．0g，溶于1000mL蒸馏水中，调pH值至7．0～7．2，然后再加2％溴甲酚紫酒精溶液0．

2、6mL，摇匀后，按5mL/管，分装包口，置压力蒸汽灭菌器中，于115℃灭菌40min后备用。　　3　指示菌　　嗜热脂肪杆菌芽胞（ATCC7953或SSIK31）菌片，含菌量为5×105～5×106cfu/片，121℃下，杀灭90％微生物所需时间D121值为1．3～1．9min，杀灭时间（KT值）为≤19min，存活时间（ST值）为≥3．9min。　　4　化学指示剂　　需用卫生部批准的化学指示剂。　　5　技术要求压力蒸汽灭菌器压力，MPa/cm2温度℃灭菌时间,min下排气式0.070115400.10512130预真空式0.2101344-6国家技术监督局19

3、95-12-15批准1996-07-01实施　　6　检测方法　　6．1　生物学指标（用作压力蒸汽灭菌设备灭菌效果的依据）。　　6．1．1　将嗜热脂肪杆菌芽胞菌片两个分别放入灭菌小纸袋内，置于标准试验包中心部位。　　6．1．2　灭菌柜室内，上、中层中央和排气口处各放置一个标准试验包（由3件平纹长袖手术衣，4块小手术巾，2块中手术巾，1块大手术巾，30块10cm×10cm、8层纱布敷料包裹成25cm×30cm×30cm大小）。手提压力蒸汽灭菌器用通气贮物盒（22cm×13cm×6cm）代替标准试验包，盒内盛满中试管，指示菌片放于中心部位两只灭菌试管内（试管口用灭菌

4、牛皮纸包封），将盒平放于手提压力蒸汽灭菌器底部。　　6．1．3　经一个灭菌周期后，在无菌条件下，取出标准试验包或通气贮物盒中的指示菌片，投入溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨水培养基中，56℃培养48h，观察培养基颜色变化。　　6．2　化学指标　　在物品包外用化学指示胶带，可作为物品是否经过灭菌的处理标志。在物品包内中心部位用化学指示剂，可作为物品是否灭菌的参考标志。　　7　结果判定及评价　　7．1　同次检测中，标准试验包或通气贮物盒内，每个指示菌片接种的溴甲酚紫蛋白胨水培养基全部不变色，判定为灭菌合格。指示菌片之一接种的溴甲酚紫蛋白胨水培养基由紫色变为黄色时，判定为灭菌不

5、合格。　　7．2　化学指示剂的颜色变为与灭菌合格标准色相同时，或熔化时作为灭菌合格的参考标准。第二篇　紫外线表面消毒效果评价方法与标准　　8　主题内容与适用范围　　本方法规定了物体表面消毒用紫外线的波长、强度及评价其消毒效果的物理学指标和生物学检测方法。　　本方法适用于紫外线直接照射到的物体表面消毒效果评价。　　9　指示菌　　9．1　大肠杆菌（8099或ATCC25922）。　　9．2　枯草杆菌黑色变种芽胞（ATCC9372）。　　10　物理学指标　　10．1　在电压220V时，普通30W直管型紫外线灯，在室温为20～25℃的使用情况下，253．7nm紫外线辐

6、射强度（垂直1m处）应≥70μW/cm2。　　10．2　在电压220V时，高强度紫外线灯，在室温为20～25C的使用情况下，253．7nm紫外线辐射强度（垂直1m处）应≥200μW/cm2。　　10．3　照射剂量按式（1）计算：　　剂量（μW·s/cm2）＝强度（μW/cm2）×时间（s）………………………（1）　　　　11　检测方法　　11．1　物理学检测方法　　11．1．1　灯管的紫外线强度（μW/cm2）用中心波长为253．7nm的紫外线强度测定仪（标定有效期内），在灯管垂直位置1m处测定。　　11．1．2　在实际应用中消毒表面的照射强度应以灯管与消毒对

7、象的实际距离测定。　　11．1．3　表面消毒接受的照射剂量，应达杀灭目标微生物所需。对大肠杆菌，照射剂量应达到20000μW·s/cm2，对枯草杆菌黑色变种芽胞应达到100000μW·s/cm2。　　11．2　生物学检测方法　　11．2．1　采用载体定量消毒试验。载体制备按本标准附录C进行。　　11．2．2　开启紫外线灯5min后，将8个染菌玻片平放于灭菌器皿中，水平放于适当距离照射，于4个不同间隔时间各取出2个染菌玻片，分别投入2个盛有5mL洗脱液（1％吐温80，1％蛋白胨生理盐水）试管中，振打80次。　　11．2．3　经适当稀释后，取0．5mL洗脱液，作平

8、板倾注，每个染菌玻片接种两个，放37℃