分离以尿素为氮源的微生物及计数

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1、微生物种类及其代谢同化作用：生物体从外界获取营养物质，转化为自身组成物质的过程。异化作用：生物体自身物质分解，放出能量，排出废物的过程。微生物种类及其代谢同化作用类型：自养型：直接利用环境中的无机物合成自身所需要的有机物。如进行光合作用的绿色植物、蓝细菌。硝化细菌——化能合成作用：利用化学反应释放的化学能，将无机物合成自身的有机物。异养型：直接利用环境中的有机物合成自身所需要的有机物。如各种动物、大多数细菌等。微生物种类及其代谢异化作用类型：有氧呼吸型（需氧型）C6H12O6+6O2+6H2O→6CO2+12H2O+能量无氧呼吸型（厌氧型）C6H12O6→2C2H5OH+

2、2CO2+能量C6H12O6→2C3H6O3+能量微生物种类及其代谢微生物包括哪些类型？构成微生物的细胞类型有哪些？不同微生物代谢类型有哪些？同化作用+异化作用=代谢类型微生物种类及其代谢微生物的类型细胞类型代谢类型举例细菌单细胞、原核细胞自养需氧型异养需氧型异养厌氧型蓝细菌、硝化细菌醋酸杆菌、大肠杆菌乳酸菌、大肠杆菌微生物种类及其代谢微生物的类型细胞类型代谢类型举例真菌单细胞、真核细胞多细胞、真核细胞异养、兼性厌氧异养需氧型酵母菌霉菌（青霉、曲霉）微生物种类及其代谢微生物的类型细胞类型代谢类型举例病毒无细胞结构，在细胞内寄生流感病毒、HIV、噬菌体、植物病毒等微生物的代

3、谢类型是配制培养基及培养的基础分离以尿素为氮源的微生物并计数实验目的1．使用专一的培养基（含有尿素）分离专一的细菌（有脲酶的细菌）2．使用指示剂颜色的变化检知酶（脲酶）所催化的反应3．说明测定细菌数量的原理与方法分离以尿素为氮源的微生物并计数实验原理（1）琼脂和琼脂糖琼脂是一种未被纯化的混合物，主要成分为琼脂糖和琼脂果胶，还含有少量的含氮化合物，及其它有机杂质和不溶性杂质。琼脂作为微生物固体培养基不可缺少的组成成分，其优点是：①其主要成分不能被微生物利用；②可使培养基固化；③不影响培养基中其他营养物质被细菌吸收。分离以尿素为氮源的微生物并计数实验原理实验是用琼脂糖代替琼脂

4、作为微生物培养基的固化剂，其目的是：尽可能使培养基中只含尿素一种含氮化合物，以防止琼脂中的含氮化合物被以尿素为氮源的细菌利用，有利于对这类细菌的筛选。分离以尿素为氮源的微生物并计数（2）酸碱指示剂（鉴定）尿素在被脲酶催化分解前是中性的，由于尿素在脲酶的催化下分解产生了NH3，溶液会呈碱性。本实验中，酚红作为酸碱指示剂被添加到了培养基中，其变色范围是pH6.4～8.2，在酸性情况下呈黄色，碱性情况下呈红色，实验原理以尿素为氮源的微生物培养一段时间后，由于细菌产生的脲酶向周围扩散，将培养基中尿素的分解，产生的NH3使培养基的pH由原来的中性变为碱性，于是培养基中的酚红由黄色变

5、成红色，圆形红色区域愈大，表明这种菌利用尿素的能力愈强。分离以尿素为氮源的微生物并计数分离以尿素为氮源的微生物并计数关键技术——“涂布分离法”涂布分离时，需要先将菌液稀释，一般稀释到10-5～10-7之间，然后取0.1mL的不同稀释度的菌液，放在培养皿的固体培养基上，再用消毒后的玻璃刮刀把这些菌液涂布在培养基平面，在适当的稀释度下，可培养产生相互分开单个的菌落。通常每个培养皿中有20个以内的单菌落为最合适。将每个菌落分别接种在斜面上扩大培养后，再做功能性实验。分离以尿素为氮源的微生物并计数基本操作步骤（1）制备空白平板：取2个三角瓶，分别装入已灭菌的全营养LB固体培养基和

6、尿素固体培养基，放在超净工作台上，冷却至60℃左右时，在酒精灯旁把上述两种培养基分别倒至2个培养皿中（做两组，共4个空白平板），轻轻摇匀，平放至凝固。分离以尿素为氮源的微生物并计数（2）制备细菌悬液：在无菌条件下，在将1g土样加到装有99mL无菌水的三角瓶中，振荡10min，即成10-2土壤稀释液，并依次制备出10-3～10-7稀释液。例如，若想制备10-6的稀释液，可取0.5mL10-5的稀释液。取样时，尽量只取悬液，倒入有4.5mL无菌水的有盖试管中，摇匀，放在试管架上。分离以尿素为氮源的微生物并计数（3）涂布法分离细菌：在无菌条件下，分别取0.1mL的稀释度为10-

7、4和10-5的土壤稀释液（细菌悬液），分别加到装有全营养LB培养基和尿素培养基的培养皿（空白平板）中；再将保存在70%酒精中的玻璃刮刀放在酒精灯火焰上，待刮刀上火焰熄灭后，在酒精灯火焰旁打开培养皿，将前面已加入的土壤稀释液（细菌悬液）均匀涂布到整个平面上。分离以尿素为氮源的微生物并计数（4）将培养皿倒置摆放在37℃恒温箱中培养24～48h，观察菌落数。观察实验结果计数：统计培养基上菌落数分离以尿素为氮源的微生物并计数培养基上菌落数统计比较1与稀释度为10-5相比，培养基中的菌落数在稀释度为10-4时2在相同的稀释度的情况下，尿