分子诊断应用于啮齿类实验动物的健康监控

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1、杭州赫贝，专业实验外包服务联系人：李海龙13857120082分子诊断应用于啮齿类实验动物的健康监控排除(隔离):进入设施前对大小鼠进行筛查监控:监控啮齿动物健康状况的变化本讲主要关注于监测-环境，传染性疾病，遗传学，饲养技术和物料健康监控=检查动物是否符合健康要求的质控措施目录•目标•要求（应排除微生物列表)•标准（如何定义阳性）•项目-测试方法-样品-频率目标（健康监控能为您做什么？）通过以下方式，促进高质量（稳定）的研究-（隔离检疫区）-排除可能干扰研究的已感染动物-（实验区）-检测特定区域内需排除病原体很难发现首发病例，其真正意义在于寻找病原体扩散的证据

2、其他原因：传染媒介，质量监控，需要向合作方运输等等目录•目标•要求（应排除微生物列表)•标准（如何定义阳性）•项目-测试方法-样品-频率要求最好符合您的需求–重点关注发生在您设施的会影响实验的传染性病原–排除列表过长会危及实验项目传染性疾病的要求=排除列表应排除病原体列表病毒：触发机体的全身反应–白细胞介素、B细胞及T细胞，感染一般较迅速，影响轻微和短暂，不可在环境中复制存活易排除。细菌：疾病一般由病原体入侵或者其产生的外毒素引起，可在环境中增殖，难排除。真菌：出现明显病变时，考虑培养辨认。寄生虫：除少数非致病物种，一般不允许存在。目录•目标•要求（应排除微生物

3、列表)•标准（如何定义阳性）•项目-测试方法-样品-频率重点关注亚临床感染-若出现临床疾病，需进行调查权衡哪些项目会影响您的工作-一个标准不能适用于全部-一个动物房可能有多重标准1.免疫正常vs.免疫缺陷动物2.短期研究vs.长期研究-不同的病原体在不同时期繁殖的速率和影响不同啮齿类动物健康评判标准从第一只动物感染到检测出来一般会延迟数周至数月尽量选择主要病原体进行检测-明显疾病的病原体-影响研究结果的病原体（特定领域）-官方应排除的病原体（认证，发文章）评判标准质控程序确认动物是否符合评判标准组成部分-样品-•动物的-品系、年龄、样品种类（血清、粪便，等等）、

4、是否暴露？•环境的-位置（静压箱（plenum)、过滤器，等等）-样品数量？-检测频率？-安排、执行及报告基于评判标准的质控程序目录•目标•要求（应排除微生物列表)•标准（如何定义阳性）•项目-测试方法-样品-频率哨兵鼠选择敏感种属，雌性，封闭群，每盒至少2只暴露方法接触法（最有效，但不实用）脏垫料法（100%脏垫料，常用）检测间接并有延迟通过哨兵鼠采样大体和显微镜检测(病理)分离培养直接检测（PCR）抗体血清学检测方法目录•目标•要求（应排除微生物列表)•标准（如何定义阳性）•项目-测试方法-样品-频率运输样本–血清（用5倍体积的PBS稀释）用于检测之前暴露的

5、病毒–粪便、口腔拭子、毛皮拭子，使用PCR方法检测细菌、寄生虫和病毒（目前感染的）–毛皮拭子（扯下或粘下的毛发亦可），使用PCR来检测管状线虫属（Syphacia）和皮螨；或者是环境拭子——采自于IVC笼架，可以替代毛皮拭子。–病变部位用10%的中性福尔马林缓冲溶液浸泡，进行组织病理学检查–鼻咽棉拭子进行PCR检测活体动物运输检测收集样本目录•目标•要求（应排除微生物列表)•标准（如何定义阳性）•项目-测试方法-样品-频率监控一般针对能真正威胁到设施安全的微生物，而非一些不常见的微生物大多数的设施监控会针对流行病原体至少每季度检一次，对于其他病原体则一年检一次质

6、量控制（QC）频率最通用的程序：–对于常见的微生物及该设施已发现过的病原体进行季度检测–年度检测时检全项–开放饲养的动物房检测房间哨兵鼠（也可以用脏垫料接触哨兵鼠）检测方法–血清学适用于大部分病毒–肉眼检查或PCR适用于寄生虫及细菌学检查日常的动物房检测1.管理、研究等人员的观察2.数据评估——繁育、研究结果等3.日常送检筛查以排除微生物感染（主要是临床症状不明显的个体）4.针对某些问题进行深入的诊断性评价（疾病、异常结果等）记住：日常健康质量控制只是整个啮齿类动物健康监测计划当中的一部分总结健康监控计划应该根据当时的（微生物感染）风险和环境类型制定很多流行性的

7、微生物不能很好地通过脏垫料进行传播，阻碍检测IVC或者带有空气过滤器的笼盒系统里的种群动物最好用血清学方法检测接触脏垫料的哨兵动物，并通过PCR检测补充结果。而对于无法完全转移到哨兵鼠上的微生物，可采用传统的寄生虫学方法检测笼架动物-环境棉拭子是一个很重要的辅助样本常规项目的质量控制检测可以不运送动物到外部实验室进行检测，但是送检活体动物对于诊断调查仍有益处THANKYOU杭州赫贝，专业实验外包服务联系人：李海龙13857120082