骨桥蛋白调节树突状细胞对乙肝病毒的反应

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1、浙江大学研究生学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得逝姿盘鲎或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：荔无荔签字日期：枷I2，年≥月f日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解逝姿盘堂有权保留并向国家有关部门或机构送交本论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权逝姿盘堂可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索和传播

2、，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名：钍扎意导师签名：刁祝签字日期：沙眵年弓月J日签字日期：沙>年；月7日浙江大学硕士学位论文致谢致谢首先，谨以最诚挚的敬意感谢我的导师刁宏燕教授。导师渊博的学识，严谨的治学态度，实事求是的工作态度以及追求事业的执着精神无不深深印在脑海中，是学生永远学习的榜样，也将激励着我在今后的学习和工作历程中不断前进。从实验设计、实验开展至整个实验的完成，她都给予了我最耐心的指导、最大的信任和鼓励。同时，在学习和生活中，她给予了我很多无私的帮助和无徼不至的关怀。其次，衷心感谢李兰娟院士为

3、我提供了如此优秀的科研平台。在这里，我学到了前沿的科研知识、先进的实验技术、广阔的国际视野，提高了自身的科研能力和综合素质。接着，感谢实验室的吴炜老师等，感谢他们一直对我的科研、学习和生活的关心和帮助。感谢实验室工作人员魏丽、康垒、张琪等给予的热心帮助。深深感谢一直给予我关心、鼓励和支持并做出无私奉献的亲人们，尤其是我的父母，您们的默默支持将激励着我勇往直前．最后，向所有关心、支持、帮助我的老师、同学、朋友们致以最真挚的谢意!浙江大学硕士学位论文中文摘要骨桥蛋白调节树突状细胞对乙肝病毒的反应浙江大学医学院硕士研究生导师中文摘要传染病学崔光莹刁宏燕教授研究背景及目的乙型肝炎病毒(h

4、印atitisB听mS，HBV)感染目前仍是严重影响中国乃至世界人类健康的重要公共卫生问题．但目前发病机制不明。病毒性肝炎的发生、发展过程中均与免疫细胞的活化及细胞因子的产生有密切的关系．树突状细胞(D饥driticCells，DC)在乙型肝炎病毒的识别及抗原呈递过程中起重要作用，影响病毒性肝炎病理生理过程中Thl、11也的活化．研究发现Dc既可诱导对肝炎病毒的免疫，又可诱导免疫耐受，取决于Dc的活化状态．并有研究发现在HBV病毒未清除患者中DC的功能受损，并在抗病毒治疗后，病毒清除过程中DC的功能得到一定的恢复，同时伴随着T细胞功能的恢复．骨桥蛋白(Ostcopontin，OP

5、N)是一种分泌性磷酸化糖蛋白，作为免疫调节因子，在DC的分化，成熟、存活方面发挥重要作用。本实验室之前的研究证明OPN在多种肝脏疾病中大量表达，与肝炎、肝癌、肝脏纤维化的发生发展及预后密切相关。本实验目的在于揭示在乙肝病毒感染过程中骨桥蛋白对树突状细胞的成熟以及分泌功能的影响，进而研究乙型肝炎中骨桥蛋白对树突状细胞作用的调节作用．材料及方法分别取野生鼠与骨桥蛋白基因敲除小鼠骨髓细胞进行培养，并给与IL．4和浙江大学硕士学位论文中文摘要GM．CSF诱导向DC方向的分化。于第六天分别给予刺激：LPS，H印G2．2．15培养上清，H印G2培养上清，HBcAg，HBsAg，以及空白对照，

6、共十二组。于48h后收集细胞及培养上清。通过流式细胞仪检测DC表面CD分子的表达，通过ELIsA检测培养上清中细胞因子水平。分别取野生鼠与骨桥蛋白基因敲除小鼠脾脏单个核细胞，并通过磁珠分选获得CD4+T细胞，野生鼠来源DC或骨桥蛋白基因敲除小鼠来源DC分别与野生鼠来源或骨桥蛋白基因敲除小鼠来源cD4+T细胞共培养，培养24h后收集培养上清。通过ELISA检测培养上清中细胞因子水平。收集健康成人抗凝血分离PBMC并进行培养，使用骨桥蛋白中和性抗体阻断骨桥蛋白作用。分别给予刺激LPS，HBcAg，HBsAg，于培养24h后收集细胞和上清。通过流式细胞仪检测DC表面CD分子的表达，通过

7、ELISA检测培养上清中细胞因子水平。结果野生型小鼠来源DC与骨桥蛋白基因敲除小鼠来源DC，在无抗原刺激情况下表面CD80，CD86，MHC．11分子表达无明显差异，在接受H印G2．2．15培养上清或HBsAg刺激后，骨桥蛋白基因敲除小鼠骨髓来源DC表达CD80，CD86，MHC．11分子明显下降，其成熟受到抑制．但HBcAg刺激则使骨桥蛋白基因敲除小鼠来源DC的CD80，CD86，MHC．11分子表达有所升高。通过对DC分泌删．a，IL-12的分析，发现在无抗原刺激时骨桥蛋白缺